【摘 要】
：
目的寻找并筛选具有抗结核功能的外泌体mi RNA并通过体外细胞功能实验明确mmu-let-7a-5p对Raw264.7单核巨噬细胞凋亡的调控作用及其对胞内感染的BCG细菌负荷的影响。方法使用牛分枝杆菌卡介苗菌株感染Raw264.7单核巨噬细胞建立结核感染的细胞模型,利用RNA-seq对外泌体中差异表达的mi RNA进行筛选,通过富集分析寻找参与细胞生长与死亡调控的mi RNAs及其靶基因,完成对高
论文部分内容阅读
目的寻找并筛选具有抗结核功能的外泌体mi RNA并通过体外细胞功能实验明确mmu-let-7a-5p对Raw264.7单核巨噬细胞凋亡的调控作用及其对胞内感染的BCG细菌负荷的影响。方法使用牛分枝杆菌卡介苗菌株感染Raw264.7单核巨噬细胞建立结核感染的细胞模型,利用RNA-seq对外泌体中差异表达的mi RNA进行筛选,通过富集分析寻找参与细胞生长与死亡调控的mi RNAs及其靶基因,完成对高通量测序结果的q RT-PCR验证。利用Target Scan和DIANA TOOLS预测候选分子mmu-let-7a-5p与Caspase-3靶向结合的可能性,将Caspase-3的3′UTR序列构建至pmir GLO,通过双荧光素酶实验明确二者是否靶向结合;合成mmu-let-7a-5p mimics/inhibitor、Caspase-3 si RNA,构建Caspase-3过表达质粒后分组转染Raw264.7巨噬细胞,MOI=10,实验组细胞BCG感染4 h,q RTPCR检测感染后24 h、48 h和72 h三个时间点胞内mmu-let-7a-5p与Caspase-3的表达变化;CCK-8检测细胞增殖活力;流式检测细胞凋亡比率;通过Rescue实验进一步明确mmu-let-7a-5p对Caspase-3的靶向调控作用;ELISA检测细胞上清炎症因子的表达变化;q RT-PCR检测mmu-let-7a-5p对外源性凋亡通路关键基因TNFR1/FADD/Caspase-8/Caspase-3的影响,Western Blot检测TNFR1、全长Caspase-3和激活型Caspase-3片段的蛋白表达;最后通过菌落形成单位计数评估mmu-let-7a-5p对胞内分枝杆菌细菌负荷的影响以及对胞内残留分枝杆菌的清除作用。结果外泌体mi RNA高通量测序结果显示Raw264.7巨噬细胞外泌体mi RNA的表达谱在BCG感染后发生明显改变,感染组中表达上调的mi RNA有20个,下调的mi RNA有7个,其中mmu-mi R-27b-3p、mi R-93-5p、mi R-25-3p、mi R-1198-5p、let-7c-5p和mmu-let-7a-5p的表达显著上调,富集分析显示这些mi RNA及其靶基因主要参与细胞凋亡的调控,Caspase-3、Bcl2l1、Casp8、Xiap、Akt1、Apaf1、Birc3、Bcl2l11、Mcl1、Diablo是参与细胞凋亡调节的Hub基因;q RT-PCR验证外泌体mi RNA的高通量测序结果准确、可信。双荧光素酶实验证实mmu-let-7a-5p与Caspase-3的3′UTR靶向结合,Caspase-3是mmu-let-7a-5p的靶基因之一;与Control组相比,BCG感染后胞内mmulet-7a-5p的表达升高,TNF-α和IL-6的分泌增加;mmu-let-7a-5p负向调控Caspase-3的表达,上调mmu-let-7a-5p能够通过靶向抑制Caspase-3的表达来增加巨噬细胞的增殖能力与活力并抑制巨噬细胞的凋亡;q RT-PCR检测TNFR1/FADD/Caspase-8/Caspase-3的表达受到明显抑制,Caspase-3的蛋白表达变化与q PCR结果一致;菌落形成单位计数结果显示上调mmu-let-7a-5p显著增加胞内分枝杆菌的细菌负荷,下调mmu-let-7a-5p明显降低胞内分枝杆菌的细菌负荷并能有效清除胞内残留的分枝杆菌。结论Mmu-let-7a-5p通过靶向Caspase-3负向调控Raw264.7巨噬细胞的凋亡,下调mmu-let-7a-5p的表达能够明显降低胞内感染的BCG细菌负荷并有利于对胞内残留分枝杆菌的清除。mmu-let-7a-5p具有作为抗结核免疫治疗靶点的潜能。
其他文献
基于液晶/聚合物复合材料的电控调光膜以其特殊的电光响应特性使其在智能窗领域中成为一类引人注目的新型材料。当前,传统的基于液晶/聚合物复合材料的正式电控调光膜以聚合物分散液晶（PDLC）模式为主,虽然已得到广泛应用,但其力学性能仍有待提高。基于液晶/聚合物复合材料的反式电控调光膜,通常以丙烯酸酯基聚合物稳定液晶（PSLC）模式为主。但其纤细的聚合物网络在电场下极容易被破坏,导致其性能下降,阻碍了其进
卫生资源是提高人口健康水平的重要保障。卫生资源投入的政策制定与实施对卫生系统和医疗卫生事业发展具有重要意义,但增加卫生资源投入是否必然提高人口健康水平仍无定论。新世纪以来,虽然我国实施了以政府为主体的卫生资源投入政策,但政策效果仍不清晰。当前,人民日益增长的美好生活需要和不平衡不充分的发展之间的矛盾在卫生健康领域不断加剧。一方面,由于人均预期寿命不断提高,人口老龄化成为我国社会的常态。近年来人口死
台湾问题既是一个政治问题,也是一个法律问题。国民党败退台湾后,将民国宪法架构的宪法秩序移植到台湾,奠定台湾地区“法秩序”中“一个中国”的基础。台湾地区“法秩序”中的“一个中国”并非静止不变,而是深受领导人政治意识形态以及“本土化”政策的影响。系统了解台湾地区“法秩序”中的“一个中国”的变迁,对于大陆把握两岸关系发展主动权、维护国家统一具有重要意义。本文从“领土”、人民两个维度,全面分析台湾地区“法
悬置是车身与发动机之间连接的隔振元件,是整车振动控制的重要单元,对提高汽车的噪声、振动与声振粗糙度（Noise、Vibration、Harshness）简称NVH有着重要作用。理想悬置低频大振幅需要大刚度大阻尼、高频小振幅需要小刚度小阻尼。因此,宽频隔振问题是悬置设计研究的难点之一。本文为解决发动机宽频隔振问题,通过分析多惯性通道液压悬置动态特性和节流盘数量对液压悬置特性影响,提出了新节流盘可控多
汽车高强板成形苛刻的现场服役条件要求Cr8钢模具有较高的耐磨性和韧性,国产Cr8冷作模具钢易开裂,模具在现场使用寿命不高。高强板成形对Cr8钢模具性能的高要求,需由模具原材料组织、热处理、表面强化等内部品质及后续工艺处理来保证。本文以国产HNC53钢为研究对象,对其原始组织及性能、真空气淬热处理之后碳化物的演变规律、表面强化工艺等进行系统研究,通过对模具摩擦磨损量进行数值模拟,结合现场实际应用,提
磁流变弹性体（MRE）是一种由铁磁颗粒嵌入无磁性弹性基体中制成的材料。作为典型的智能材料,MRE能够响应外部磁场,产生迅速、可逆的材料特性变化,在减振、柔性机器人等领域具有广泛的应用前景。影响MRE材料特性的因素有很多,包括基体材质、铁磁颗粒材质等。其中,铁磁颗粒链状排布的角度既能够影响MRE在磁场中的剪切特性,又能够影响其被匀强磁场驱动所呈现的静平衡角度。基于此,围绕链状结构角度对MRE剪切特性
目的:通过肠道菌群及血浆氨基酸-脑神经递质代谢探索柴氏逍遥散改善乳腺癌相关抑郁的作用及机制。方法:第一部分,通过查阅文献,分析血氨基酸-脑神经递质代谢、肠道菌群与乳腺癌、抑郁的相关性;结合中医传统理论和柴师临床研究经验,总结柴氏逍遥散治疗乳腺癌相关抑郁“疏肝”和“健脾”的代表性治则治法;论证基于血氨基酸-脑神经递质代谢和肠道菌群变化理论,研究柴氏逍遥散治疗乳腺癌相关抑郁的合理性。第二部分,采用Ba
如何提高员工助人积极性日益成为学术界与实业界共同关注的焦点问题。工作场所帮助行为因其在促进交流学习、增强团队凝聚力和提升组织效率等方面发挥的积极作用而备受推崇。然而,工作场所帮助行为在提升组织有效性的同时,也对施助者造成了不小的负担,其“阴暗面”效应使得组织在鼓励员工帮助同事的道路上困难重重。现有研究从动机和内容视角对工作场所帮助行为的维度结构进行划分,对丰富施助者自主意愿和帮助方式领域的知识具有
本文以定性分析为主要研究方法,辅之以历史文献分析和跨学科多角度知识之间的多方位研究办法,对现存最大规模的联邦缉毒机构进行考察研究。研究着重于关注美国历史上存在的禁毒法体系、缉毒机制、成瘾认识变化、“毒品战争”以及“联邦缉毒署”自身所具备的并在发展中拥有的功能机制等多维度因素,在对文献资料进行不断有效地提炼之后,力争将对“联邦缉毒署”的学术认识,从相对单一平面程度的学术把握,逐步深化到较有立体感的可