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背景与目的：核纤层是在真核细胞中普遍存在的结构，位于核被膜之下、与细胞核内膜紧密结合的—层电子密度高的纤维网络结构。核纤层蛋白可分为A型和B型两种，分别由A型核纤层蛋白基因(LMNA)和B型核纤层蛋白基因(LMNB)编码，与中等纤维蛋白家族具有高度同源性，可能在维持核膜完整性、提供染色体锚着位点以及在核周期性的解体和重组装过程中发挥重要作用。A型核纤层蛋白(lamin A)基因突变或其加工酶 Zmpste24活性丧失可导致细胞内prelamin A 堆积，从而引起多种疾病的产生，包括多种肌营养不良症和心肌病综合症等，统称为核纤层蛋白病。为研究lamin A在肌营养不良症中的发生机制，本研究拟采用酵母双杂交系统从人骨骼肌cDNA文库中筛选与lamin A相互作用的蛋白。
方法：扩增Lamin A的C末端831bp的片段，构建于pGBKT7载体上，即BD质粒；将其与构建于pACT2质粒(酵母双杂交中的AD质粒)的人骨骼肌cDNA文库共转染感受态酵母菌 AH109。用AD质粒和BD质粒进行酵母双杂交实验，以初步筛选出阳性候选克隆，再对上述筛选的阳性候选克隆进行一对一回复性杂交，最后筛选出真阳性克隆(即与lamin A相互作用的蛋白)。经上述一对一回复确证为阳性相互作用的AD质粒，以pACT2质粒的通用引物为测序引物测定该质粒的插入片段cDNA序列。通过国际互联网络，以美国国立生物信息中心(NCBI)的BLAST作为主要的检索工具，检索主要程序采用BLASTN，对相互作用蛋白的cDNA 序列进行同源性分析，最终确定该相互作用蛋白的名称。
结果：经过酵母双杂交实验,筛选出9种与lamin A相互作用蛋白，核酸序列分析及同源性检索结果为：①插入片段约为768bp，其149～768bp与人心肌ATP酶Ca<2+>转运快速转换体1(ATP2A1)cDNA2 246～2 866bp 有100.0％同源性。②插入片段约为928bp，其146～928与人钙粘蛋白15的1 533～2 315bp有100.0％同源性。③插入片段约为975bp，其147～975bp与人整联蛋白β1的1 161～1 991bp 有 100.0％同源性。④插入片段约为598bp，其61～587bp与人铜代谢(Murr1)域包含1(COMMD1)的27～553bp 有100.0％同源性。⑤插入片段约为787bp，其67～774bp与人似Der-1域家族成员2(DERL2)的5～712bp有100.0％同源性。⑥插入片段约为916bp，其150～515bp与人营养不良性肌强直蛋白激酶(DMPK)的1369～1734bp有100.0％同源性。⑦插入片段约为868bp，其140～843bp与人B细胞淋巴瘤类13(促凋亡因子)(BCL2L13)的512～1 215bp有100.0％同源性。⑨插入片段约为954bp，其152～954bp与人热激蛋白 90kD ATP 酶激活子同源体1(AHSA1)的291～1093bp有100.0％同源性。⑨插入片段约为947bp，其153～946bp与人假设蛋白FLJ39502(FLJ39502)的1998～2 791bp 有100.0％同源性。
结论：用酵母双杂交系统从人骨骼肌eDNA文库中筛选出9种与lamin A相互作用的蛋白。