论文部分内容阅读
目的:通过检测实验性结肠炎小鼠结肠组织Toll样受体4(Toll-Like Receptor 4,TLR4)、核转录因子-κB p65(Nuclear FactorκB p65,NF-κB p65)以及法尼醇X受体(Farnesoid X Receptor,FXR)蛋白的表达,探讨熊去氧胆酸(Ursodeoxycholic Acid,UDCA)、双歧三联活菌(Bifid Triple Viable,Bifid)及联合应用治疗葡聚糖硫酸钠(Dextran Sulfate Sodium,DSS)诱导的小鼠实验性结肠炎的疗效及可能机制,为临床炎症性肠病(Inflammatory Bowel Disease,IBD)的治疗提供实验依据。方法:1.将实验小鼠分为正常组(Control)、模型组(DSS)、熊去氧胆酸剂量组(30mg/kg/d,UDCA1和60mg/kg/d,UDCA2)、双歧三联活菌组(2.0′10~7CFU/ml,Bifid)、熊去氧胆酸与双歧三联活菌联合组(Bifid+UDCA1和Bifid+UDCA2)以及正性药物对照组即柳氮磺吡啶(Sulfasalazine,Sulfa)组(200mg/kg/d,Sulfa);2.除Control组,其余组分别予以自由饮用3.5%DSS溶液7d,建立急性结肠炎模型,对不同组分别给予对应药物,并每天观察记录小鼠的体重增减百分比、粪便性状、粪便隐血或便血情况评估疾病活动指数(Disease Activity Index,DAI);给药结束后测量记录结肠长度以及HE染色评估各组结肠组织学变化;Western Blot检测结肠组织白细胞介素-17A(Interleukin-17A,IL-17A)、白细胞介素-10(IL-10)蛋白表达,评估结肠炎症水平;同样采用Western Blot检测结肠组织TLR4、NF-κB p65蛋白表达,评估肠道肠屏障功能、肠道微生物失衡;检测结肠组织FXR蛋白表达,评估胆汁酸代谢水平。结果:1.各组实验性结肠炎小鼠DAI、结肠长度、组织病理学评分:与Control组比较,DSS组小鼠体重下降,出现粘液血便,DAI增加,结肠长度缩短,结肠组织学表现为粘膜上皮损伤,炎症细胞浸润,隐窝炎、隐窝结构破坏,组织病理学评分增加(P<0.05);与DSS组比较,UDCA1组无明显差异,UDCA2组、Bifid组、联合用药组(Bifid+UDCA1和Bifid+UDCA2)及Sulfa组对以上出现的病变有改善(P<0.05),联合用药组缓解作用较对应单一UDCA组、Bifid组更显著(P<0.05);Bifid+UDCA2组与Sulfa组比较对DAI增加、结肠长度缩短的改善作用无明显差异。2.各组实验性结肠炎小鼠结肠IL-17A、IL-10表达:与Control组比较,DSS组小鼠结肠促炎因子IL-17A蛋白表达升高(P<0.05),抗炎因子IL-10蛋白表达下降(P<0.05);与DSS组比较,UDCA1组无明显差异,UDCA2组、Bifid组、联合用药组(Bifid+UDCA1和Bifid+UDCA2)及Sulfa组IL-17A蛋白表达降低(P<0.05),IL-10蛋白表达升高(P<0.05),联合用药组较对应单一UDCA组、Bifid组对IL-17A表达降低作用更显著(P<0.05),对IL-10表达升高作用更显著(P<0.05);Bifid+UDCA2组与Sulfa组比较无明显差异。提示联合用药对抗炎症反应优于单一用药。3.各组实验性结肠炎小鼠结肠TLR4、NF-κB p65、FXR表达:与Control组比较,DSS组小鼠结肠组织病原体相关分子模式识别受体TLR4及级联诱导的NF-κB p65表达上调(P<0.05),胆汁酸受体FXR表达下调(P<0.05);与DSS组比较,UDCA1组无明显差异,UDCA2组、Bifid组、联合用药组(Bifid+UDCA1和Bifid+UDCA2)及Sulfa组小鼠结肠组织TLR4、NF-κB p65蛋白表达降低(P<0.05),FXR蛋白表达升高(P<0.05),联合用药组较对应单一UDCA组、Bifid组对TLR4、NF-κB p65蛋白表达降低作用更显著(P<0.05),对FXR蛋白表达的升高作用更显著(P<0.05);Bifid+UDCA2组与Sulfa组比较对TLR4、NF-κB p65蛋白表达降低作用无明显差异。提示联合用药对肠黏膜屏障功能、肠道菌群失衡的改善,肠道胆汁酸代谢的调节作用更显著。结论:1.高剂量熊去氧胆酸、双歧三联活菌及联合用药均可降低DAI,减少结肠长度缩短,减轻组织病理学损伤;2.高剂量熊去氧胆酸、双歧三联活菌及联合用药可通过下调结肠炎症因子IL-17A、上调抗炎因子IL-10表达,调节异常的炎症反应;3.高剂量熊去氧胆酸、双歧三联活菌及联合用药能够抑制结肠TLR4、NF-κB p65表达,增加FXR表达,调节肠黏膜屏障功能、肠菌群平衡及胆汁酸代谢;4.联合用药较单一用药有更好疗效,对实验性结肠炎小鼠发挥更好的治疗作用。