【摘 要】
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第一部分:小鼠胚胎干细胞的体外培养 目的:胚胎干（ES）细胞是从早期胚胎中分离出来的全能细胞系,体外培养时可维持其发育的全能性、未分化状态和正常的二倍体核型,能发育为含外、中、内三个胚层的胚胎体,在体内能参与包括生殖系的嵌合体。ES细胞可作方研究细胞定向分化、多发育潜能及细胞发育分化机制的模型,并有望应用于细胞和基因治疗领域,从而引起人们的广泛兴趣。ES细胞的体外培养条件比较严格,不仅要保持
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第一部分:小鼠胚胎干细胞的体外培养 目的:胚胎干（ES）细胞是从早期胚胎中分离出来的全能细胞系,体外培养时可维持其发育的全能性、未分化状态和正常的二倍体核型,能发育为含外、中、内三个胚层的胚胎体,在体内能参与包括生殖系的嵌合体。ES细胞可作方研究细胞定向分化、多发育潜能及细胞发育分化机制的模型,并有望应用于细胞和基因治疗领域,从而引起人们的广泛兴趣。ES细胞的体外培养条件比较严格,不仅要保持其扩增、增殖的能力,而且要维持其未分化的特性。本部分以原代小鼠胚胎成纤维细胞（PMEF）或白血病抑制因子（LIF）与ES细胞系共培养方法来体外扩增ES细胞,为以后的研究工作打下基础。 方法:本研究利用小鼠的ES-D3细胞系作为研究对象。首先取孕13-14天的胎鼠组织制备PMEF作为饲养层,经丝裂霉素-C灭活后用于ES细胞的培养,将ES-D3细胞分别培养于PMEF上或含LIF的ES细胞培养基中,培养基为高糖DMEM,内含体积分数20%胎牛血清、1%非必需氨基酸、0.1 mmol/L β-巯基乙醇和2 mmol/L谷氨酰胺。观察在此两种条件下,ES-D3细胞的生长状况和克隆形成情况。 结果:在存在PMEF或有LIF时,体外均支持ES细胞的生长扩增。但两种
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