手性农药呋虫胺在黑斑蛙蝌蚪体内的富集降解及毒性效应研究

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新烟碱类农药是一类广泛应用于农业的杀虫剂,对害虫具有较高的杀虫活性和选择性。而呋虫胺是第三代新烟碱类化合物,对水生生物具有一定的生态毒性。本文以黑斑蛙蝌蚪作为模式生物,从对映体水平上开展了呋虫胺在黑斑蛙蝌蚪体内的选择性富集降解及毒性效应试验。主要研究内容与结论如下:1、通过Superchiral R-AD手性柱和液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)建立了呋虫胺对映异构体在黑斑蛙蝌蚪和水样中的检测方法,并对该方法进行了验证。结果表明:在0.01-10 mg/L范围内线性关系良好,R-(–)-呋虫胺和S-(+)-呋虫胺在黑斑蛙蝌蚪和水体基质中的平均添加回收率在86.83-98.91%,相对标准偏差(RSD)<10.2%,定量限(LOQ)和检出限(LOD)值分别为0.01 mg/kg和0.003 mg/kg,该方法的稳定性、准确度及精密度性均符合农药残留分析要求。2、开展了急性和亚慢性毒性试验。结果表明:呋虫胺对黑斑蛙蝌蚪急性毒性大小顺序为R-(–)-呋虫胺>Rac-呋虫胺>S-(+)-呋虫胺。在0.2、2 mg/L的药液中暴露28 d后,与对照组相比,通过测量R-(–)-呋虫胺和Rac-呋虫胺对黑斑蛙蝌蚪的生长产生了抑制作用,且R-(–)-呋虫胺产生的影响大于Rac-呋虫胺,而S-(+)-呋虫胺对其的生长没有显著影响。3、进行了呋虫胺在黑斑蛙蝌蚪体内的富集-降解试验。结果表明:黑斑蛙蝌蚪对呋虫胺的有显著的立体选择性,优先富集R-(–)-呋虫胺;黑斑蛙蝌蚪体内能快速消除体内的呋虫胺对映体,S-(+)-呋虫胺优先降解。水中呋虫胺立体异构体的EF值基本保持在0.5左右,表明呋虫胺在水环境中没有立体选择性。呋虫胺的两个异构体的BCF值小于10,在黑斑蛙蝌蚪体内属于低富集性农药。4、Gosner 26期黑斑蛙蝌蚪暴露于0.2、2 mg/L呋虫胺及其对映体28 d,黑斑蛙蝌蚪甲状腺激素含量及其相关基因表达结果表明:黑斑蛙蝌蚪暴露于0.2、2mg/L的Rac-呋虫胺和R-(–)-呋虫胺28 d后,头部的甲状腺激素T3与T4受到了干扰,其含量明显下降。与对照组相比,2 mg/L的R-(–)-呋虫胺暴露下,对黑斑蛙蝌蚪产生甲状腺内分泌干扰作用,在蝌蚪脑组织中dio2基因m RNA水平显著升高。且2 mg/L的Rac-呋虫胺处理下,dio3基因相对表达量与对照组相比显著升高。在本研究中,低高浓度的R-(–)-呋虫胺和高浓度的Rac-呋虫胺诱导黑斑蛙蝌蚪头部trα和trβ基因相对表达量显著降低,而低浓度的Rac-呋虫胺相对表达量无显著变化。5、研究了呋虫胺对黑斑蛙蝌蚪的氧化损伤。结果表明:呋虫胺一定程度地影响了抗氧化酶活性,通过谷胱甘肽还原酶(GR)酶活性水平的升高来解毒;且呋虫胺及其对映体诱导黑斑蛙蝌蚪产生了氧化应激,黑斑蛙蝌蚪体内的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽S-转移酶(GST)、乙酰胆碱酯酶(ACh E)和丙二醛(MDA)含量发生了显著变化。
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