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[研究背景]甲状腺癌(Thyroid carcinoma,TC)是内分泌系统最常见的恶性肿瘤,女性患者多发。甲状腺乳头状癌(Papillary thyroid carcinoma,PTC)是其中最常见的恶性肿瘤,甲状腺微小乳头状癌(Papillary thyroid microcarcinoma,PTMC)是PTC的一种亚型。目前,常用组织病理学检测方法鉴别良恶性肿瘤。在交界性病变组织形态学特征不明确的情况下,仅靠组织学水平的检测很难对甲状腺癌与交界性病变进行准确鉴别。随着分子生物学以及蛋白质组学的发展,对甲状腺癌的肿瘤标志物进行了较多的研究,CK19、Galectin-3和TPO是三种重要且常用的甲状腺肿瘤标记物,但对甲状腺交界性病变的研究报道较少。[目的]分析和鉴定PTC与交界性病变的差异表达蛋白,筛选出两种病变新的蛋白标记物。探讨CK19、Galectin-3和TPO在PTC与交界性病变中的表达及鉴别诊断意义。[方法]从冰冻样本中分别提取PTC、PTMC、交界性病变与正常甲状腺组织的总蛋白进行双向凝胶电泳(Two-dimensional electrophoresis,2-DE),经 PDQUEST 7.3图像分析软件检测出表达差异点,利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱和Swiss-prot数据库对差异蛋白进行鉴定。通过PANTHER分析对差异蛋白进行分类。构建组织芯片,选择其中十种差异蛋白用免疫组化染色进行验证。通过免疫组化检测50例PTC、71例交界性病变和35例正常甲状腺组织中CK19、Galectin-3、TPO的表达情况。分析三种标记物与PTC的临床病理联系。[结果]四组样本两两比较共发现43个蛋白差异点,通过质谱分析鉴定出29种差异表达蛋白,包括CK8,CK18,HSP60等。选择重复性较好、相对含量较高的10种蛋白进行免疫组化验证研究,10种蛋白均定位于胞质,CTSB、ANXA5、CRT在胞膜中也有表达;8 种蛋白(CTSB、ANXA5、γ-Actin、GSTP1、CRT、HSP60、CK8和CK18)在PTC中的表达均显著高于交界性病变及正常甲状腺组织,在交界性病变中的表达显著高于正常甲状腺组织。2种蛋白(CNDP2和PDIA3)在PTC和交界性病变中的表达高于正常甲状腺组织,在PTC与交界性病变中的表达无差异。ANXA5、HSP60、CK8和CK18四种标记物联合应用,在鉴别交界性病变与正常甲状腺时,HSP60/CK8/CK18组合的曲线下面积(Area under curve,AUC)最大,为93.3%;用于鉴别PTC与正常甲状腺时,ANXA5/HSP60、ANXA5/HSP60/CK8、ANXA5/HSP60/CK18、HSP60/CK8/CK18和ANXA5/HSP60/CK8/CK18 的 AUC 值均达到 100%;而 ANXA5/HSP60/CK8/CK18四种标记物联合检测用于PTC与交界性病变的鉴别诊断时AUC值最大,为98%。CK19、Galectin-3在PTC中的表达均高于交界性病变及正常甲状腺组织,TPO在PTC中的表达均低于其余两组。联合应用CK19和TPO鉴别PTC与交界性病变时,敏感性、特异性、诊断准确率分别为88%、91.3%、89.9%。在交界性病变中,CK19与Galectin-3的表达正相关,CK19、Galectin-3与TPO的表达负相关;在PTC中,CK19与Galectin-3的表达正相关,与TPO的表达负相关。PTC中,CK19在不同的患者性别、年龄、肿瘤直径、肿瘤多灶性、淋巴结转移、远处转移和临床分期中均无统计学差异,Galectin-3在女性患者中的表达高于男性,TPO在男性患者中的表达高于女性患者,而与年龄、肿瘤大小等特征无关。[结论]本研究提示蛋白质组学分析有助于发现新的PTC和交界性病变的蛋白标记物,免疫组化染色进一步确认这些蛋白在组织细胞中的表达模式更有利于PTC的早期病理诊断。ANXA5、HSP60、CK8和CK18联合检测用于PTC、交界性病变与正常甲状腺的两两鉴别具有较高的诊断价值。CK19、Galectin-3、TPO可以作为鉴别PTC及交界性病变的重要参考标记,联合三种抗体可提高鉴别PTC及交界性病变的诊断准确率。