抗菌高分子接枝修饰蛋白及其性能的研究

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大多抗菌蛋白具有一定的抑制细菌或真菌的作用,已成功应用于动植物病菌防治上。但抗菌蛋白存在抗菌范围窄、易失活、易受环境变化影响等问题,限制了其在食品医药卫生领域的发展。抗菌高分子抗菌效果好、抗菌范围广、原料易得、耐受性好,是一种稳定的有机抗菌剂。本研究拟结合两种抗菌材料优势形成抗菌蛋白高分子复合体,以提高抗菌材料的各项性能。将抗菌高分子接枝到抗菌蛋白上,探索了一种利用化学修饰合成方法结合蛋白质生物大分子和有机抗菌高分子功能的新的研究方法和思路。解淀粉芽孢杆菌NK-2天然菌株可分泌具有抑菌作用的yhfE蛋白,从解淀粉芽孢杆菌MG-3菌种基因组中扩增yhfE蛋白的基因构建PET-28a-yhfE重组表达载体,利用大肠杆菌原核表达系统在大肠杆菌BL21中表达。菌体细胞破碎后蛋白经镍离子亲和层析柱纯化,得到分子量约46KDa的yhfE目的蛋白。yhfE蛋白与5-磷酸吡哆醛(PLP)按比例反应修饰,得到蛋白质N端被定向修饰成醛基的蛋白yhfE-CHO。yhfE-CHO蛋白与引发剂(2-(氨氧基)乙基)2-溴-2-甲基丙酸甲酯((2-(aminooxy)ethyl)2-bromo-2-methylpropanoate,ABM)反应得到yhfE-i。yhfE-i与抗细菌粘附单体聚(乙二醇)甲基丙烯酸酯(Poly(ethyleneglycol)methacrylate,OEGMA)、抗菌单体甲基丙烯酰氧乙基三甲基氯化铵(Methacroylcholine Chloride,MTAC)分别经过表面引发聚合反应接枝到yhfE蛋白上,形成yhfE-OEGMA、yhfE-OEGMA&MAC、yhfE-MTAC系列蛋白高分子复合体。经蛋白电泳和纳米粒度仪表征表明蛋白表面成功修饰上高分子。实验表明,yhfE蛋白对真菌枇杷焦腐病菌有较弱的抑菌能力,对细菌包括革兰氏阴性菌和阳性菌几乎没有抑菌能力;聚合修饰抗菌高分子的蛋白经过浊度实验、平板抑菌圈实验、玻片蛋白印记实验都表明其对细菌有明显的抑制作用,对真菌抑菌效果得到增强。本研究成功表达纯化出yhfE抗菌蛋白并合成抗菌蛋白高分子复合体,验证了抗菌能力,为开发新的广谱高效的抗菌材料提供了思路和初步的验证。
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