目的:利用中药淫羊藿(Epimedium,EP)可“补肾阳,强精骨”作用,将其加入到骨基质的要素材料羟基磷灰石(Hydroxyapatite,HA)、丝素蛋白(Silk fibroin,SF)、壳聚糖(Chitosan,CS)中,通过低温冷冻干燥技术制备出HA-SF/CS/EP复合支架材料,研究其对成骨细胞粘附、生长、增殖的影响规律,为用于骨修复提供理论基础,并为临床应用提供可靠依据。方法:取新生24小时内的Wistar大鼠颅盖骨,采用改良胶原酶消化法进行成骨细胞原代培养,7天后对均匀贴壁生长的单层细胞行第一次传代,并用差速纯化法分离成骨细胞和其他杂质细胞,随后将纯化后的成骨细胞进行传代培养,通过倒置相差显微镜、HE染色、碱性磷酸酶改良钙钴法染色、钙结节茜素红染色等手段对获得的细胞进行生物学特性的研究与鉴定。然后取第三代最佳生长状态的成骨细胞,按5×104/ml密度接种到HA/CS、HA-SF/CS、HA-SF/CS/EP三种支架材料表面常规培养,用倒置相差显微镜及扫描电镜观察细胞形态,通过碱性磷酸酶活性测定法和MTT法测量出三种支架材料对细胞增殖的影响。结果:1、从形态学上看,经鼠颅盖骨培养出的成骨细胞呈短梭形或多角形,符合成骨细胞形态和生长特性。2、从组织学上看,培养的细胞通过碱性磷酸酶染色,镜下可见胞浆中棕色至黑色颗粒的为阳性细胞,具有ALP活性;通过茜素红染色,可观察到钙结节形成,符合成骨细胞鉴定标准。3、SEM观察,3天时,HA/CS、HA-SF/CS、HA-SF/CS/EP三种材料表面均有少量成骨细胞粘附,9天时,三种材料表面的成骨细胞量均增多,细胞伸展良好,并有向孔隙内伸展的趋势。但可见HA/CS-SF-EP组的细胞数量较前两组多。4、通过碱性磷酸酶活性测定法,成骨细胞与HA/CS、HA-SF/CS、HA-SF/CS/EP三种支架材料复合后第3至9天分泌的ALP含量呈上升趋势。3、6、9天不同培养时间细胞内ALP的含量差异显著,有统计学意义(P < 0.05)。通过MTT比色法,实验组与对照组相比,有统计学差异(P < 0.05);各实验组之间相比,有统计学差异(P <0.05)。统计分析表明HA-SF/CS/EP组OD值明显高于其他实验组和对照组,提示HA-SF/CS/EP对成骨细胞增殖有明显促进作用。结论:1、通过碱性磷酸酶活性测定法和MTT比色法,表明HA-SF/CS/EP较HA/CS和HA-SF/CS更能促进成骨细胞的增殖;通过SEM观察,表明HA-SF/CS和HA-SF/CS/EP均具有较好的生物相容性。2、中药淫羊藿具有促进成骨细胞增殖的作用,HA/CS-SF-EP具有作为骨组织工程支架材料的可行性。