芦笋老茎中黄酮类物质的提取分离及纯化研究

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芦笋是世界十大名菜之一,其食用价值和药用价值都非常可观。我国芦笋主要以罐藏及速冻产品形式出口,过了收获季节后有大量的老茎没法利用,其中含有丰富的黄酮类化合物。黄酮类化合物及其衍生物具有广泛的生理活性,既可作为心脑血管及高血压等疾病的治疗药物,又可用做保健食品和食品添加剂,也可在化妆品中应用。本研究从芦笋老茎中提取黄酮类化合物,既可为黄酮类化合物的提取提供新的资源和工艺,又可扩大芦笋老茎这种废物的综合利用,变废为宝,为农民增加收入。 本研究以芦笋老茎为原料,研究了芦笋老茎中不同部位黄酮类化合物的提取工艺条件及纯化方法。 1.以芦丁为标准品,利用铝盐可见分光光度法,得出芦笋总黄酮提取的标准工作曲线,标准曲线的回归方程为C=0.0882A+0.0015,其相关系数r=0.9989。 2.采用索氏抽提法得出芦笋老茎,老叶,老根中黄酮类化合物的最大含量分别为:5.17%,0.65%,2.95%。 3.在提取芦笋中黄酮类物质的工艺过程中,对芦笋老茎中黄酮类物质分别进行了热水浸提,超声波强化热水浸提,有机溶剂浸提,超临界二氧化碳流体萃取工艺条件的研究,通过正交试验确定最佳浸提工艺。结果表明:热水浸提,调节溶液pH为10,加水体积与原料质量为1∶10,提取温度为70℃,时间2.5h,提取效果最好,芦笋总黄酮得率最高可达2.8%。超声波强化热水提取芦笋总黄酮,提取温度为50℃,料液比1∶05,时间45分钟,超声功率为150w,总黄酮得率明显高于热水浸提,最高可达4.23%。乙醇溶液提取芦笋总黄酮,体积分数70%的乙醇水溶液,料液比为1∶25,提取温度60℃,时间6h,乙醇提取得率可以达到5.6%。超临界二氧化碳流体萃取芦笋黄酮的最佳工艺条件为:萃取压力30MPa,夹带剂用量2.0mL/g,萃取温度70℃,萃取时间1.5h,总黄酮得率3.7%。 4.分离纯化是获取天然产物有效成分的重要步骤。本研究考察了大孔吸附树脂及高速逆流色谱两种分离方式。结果显示,AB-8树脂对芦笋老茎总黄酮的吸附、解吸性能均较好。选用石油醚进行粗提液除脂后,调节吸附原液pH值为6,料液浓度为0.4mg/mL,上样量为8mL,流速2mL/min,氯化钠加入量为6mg/mL条件下进行吸附;解吸采用体积分数80%乙醇溶液,在pH为6,以1.5mL/min流速,洗脱剂用量为200mL进行解吸,可使芦笋老茎黄酮类物质较好的纯化。高速逆流色谱,选择溶剂体系为:水-甲醇-乙酸乙酯-正己烷(4∶2∶3∶1v/v);固定相:上相;流速:2mL/min;转速:850r/min;进样量:5mL提取液;紫外检测波长:254nm;固定相保留率:55%。 对于黄酮类物质的检测及鉴定,本研究确立了以铝盐可见分光光度法跟踪检测,颜色反应、紫外扫描法、薄层层析法、和高效液相色谱法定性和定量鉴定的一套完整体系。
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