蛋白质合成过程是一个开放的系统，其中多种因子与细胞内蛋白质相互作用调节蛋白质的合成过程，维持细胞内所有生命过程的有序进行，同时细胞内有一系列蛋白质包括一些酶参与蛋白质合成的调节，形成了复杂的mRNA代谢和蛋白质合成的网络和信号转导途径。酵母双杂交文库是筛选与目的蛋白质相互作用蛋白质的一种非常有效的方法。利用该方法已经筛选得到了许多相互作用的目的蛋白质，为研究细胞内的蛋白质相互作用网络和信号转导途径提供了极为有效的工具。　　蛋白质的合成过程包括核糖体上肽链合成的起始、延伸和新生肽链的释放。肽链释放因子不仅在细胞内蛋白质合成终止过程中起作用，而且在其它方面也起到重要作用，表现出多功能蛋白质的特征。　　原生动物八肋游仆虫是一类单细胞真核生物，其密码子使用存在特殊性:终止密码子UGA在该生物体中编码半胱氨酸。据相关文献报道纤毛虫中八肋游仆虫的阅读框中终止密码子(UGA)出现的频率最低，其mRNA最有效的被翻译成了高分子量的连续的多肽链，这一结果为首次纤毛虫酵母双杂交文库的构建提供了重要依据。　　本研究以八肋游仆虫为材料，提取总RNA，用mRNA反转录得到的cDNA构建酵母双杂交文库，用蛋白质合成终止过程中负责新生肽链释放的两类肽链释放因子作为诱饵蛋白，筛选与其相互作用的蛋白质，获得了以下主要结果:　　提取了八肋游仆虫总RNA，琼脂糖凝胶电泳中28S rRNA条带显示得到了较为理想的提取物;利用clontech公司的BD MatchmakerTM Library Contruction&Screening kit试剂盒，将得到的总RNA中的mRNA利用两步法合成ds cDNA，通过纯化、富集、再纯化得到了与对照相比丰度比较适合的cDNA;用PCR方法对得到的cDNA进行了鉴定，结果扩增到已知的基因。将得到的cDNA与用SmaⅠ单酶切处理的文库质粒pGADT7-Rec混合，转化接合酵母菌AH109，涂板培养，收集克隆;最后分析文库滴度为2.437×107cfu/mL，文库构建基本完成，随后随机提取文库中的质粒，用质粒pGADT7-Rec上的测序引物进行测序分析，证明在质粒中重组了八肋游仆虫的基因片段。　　以蛋白质合成终止过程中的两类肽链释放因子之一eRF3作为诱饵蛋白基因，利用酵母双杂交的方法从游仆虫cDNA文库中筛选与诱饵蛋白基因相互作用的蛋白基因。获得以下结果:1）构建了含诱饵蛋白基因的重组质粒pGBKT7-eRF3，将其转化到接合菌Y187中，对Y187/pGBKT7-eRF3菌株进行了鉴定，提取质粒转化大肠杆菌，进行扩增，将得到的质粒进行分析和测序，结果表明成功构建了含有融合诱饵蛋白重组基因的目的菌株;2）文库菌和诱饵菌杂交，接合率大于2％;将接合后的菌液涂于SD/-Leu/-Trp/-His平板上进行初级筛选，获得了200个阳性克隆;再将初级筛选得到的克隆涂于SD/-Leu/-Trp/-His/-Ade平板上进行严谨性筛选，获得了36个克隆;重复严谨性筛选后得到22个克隆;最后用β-半乳糖苷酶活性进行鉴定，获得16个阳性克隆，一系列的筛选总率为8％。3）将筛选出的阳性菌落提取质粒后转化大肠杆菌DH5α，用获得的高拷贝质粒进行PCR和酶切鉴定。测序结果表明，16个质粒中6号和74号质粒含有较长的未知基因阅读框核酸序列;BLAST比对结果显示33号和105号与游仆虫核糖体RNA的序列类似;其余测序结果与这四个序列基本相同。4）酵母双杂交重复鉴定实验表明6号是阳性结果，说明其编码的蛋白质在体内与诱饵蛋白eRF3相互作用;74号结果呈阴性，需要再做体外实验进一步确认。5）根据6号质粒的测序结果设计引物，以及端粒序列设计的引物，以八肋游仆虫大核基因组为模板，扩增目的基因。得到长度约为900bp的基因片段，下一步进行测序证实。