论文部分内容阅读
本研究在实验室前期工作的基础上,进一步对孔雀石绿降解菌AN3进行了深入研究,取得了理论以及应用方面的一些进展。
通过对投放过孔雀石绿的养殖池塘中水样的孔雀石绿和隐性孔雀石绿残留的含量,发现水样中隐性孔雀石绿的平均含量为2.78-53.47 ng/ml,孔雀石绿的含量低于检测下限。结合这一现状,以罗非鱼和淡水白鲳鱼为养殖对象,研究在含有不同浓度的隐性孔雀石绿的养殖水体中生长的罗非鱼和淡水白鲳鱼肌肉中是否会富集隐性孔雀石绿。结果表明:即使在隐性孔雀石绿初始浓度为1.00 ng/ml的养殖水体中,隐性孔雀石绿在罗非鱼和淡水白鲳鱼肌肉中的积累浓度分别高达60.0ng/g和70.8 ng/g;
对AN3进行了脱色及降解孔雀石绿能力的测定并对其生长特性进行了研究。试验结果表明,AN3对10μg/ml的孔雀石绿的脱色率在3个小时内达到98.17%,对于初始浓度为2 ug/ml的孔雀石绿经过10天降解率达68.83%;菌株AN3在37℃、180 r/min条件下摇床振荡培养的生长曲线为:0~3 h为生长延迟期,3~12 h为对数生长期,12 h以后进入稳定期;其最适生长pH为9,温度为37℃,碳源为柠檬酸钠,氮源为NH4Cl。
对AN3的发酵培养基以及液体发酵条件进行了优化。确定了最佳碳源和氮源为1.5%全麦粉、1.5%大豆蛋白胨;最适发酵温度为35℃~37℃,最适pH值8.0。进行了1 L发酵罐培养,12 h达到生长高峰期,最适放罐时间为13 h左右,此时所获得的菌体数量约为1.0×1011 cfu/ml。
利用菌株AN3、纳豆菌和含有孔雀石绿降解基因的毕赤酵母基因工程菌制作了固体菌剂、液体菌剂以及酵母酶制剂。并将这三种菌剂投放到含有10 ug/ml孔雀石绿的静置溶液中,发现酵母酶制剂和液体菌剂具有比较好的净化效果,曝气可以提高各种菌剂的净化效果,尤其是可以大大提高固体菌剂的净化率。