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第一部分2019年广州地区儿童人腺病毒感染的分子流行病学特征及系统发育分析背景:人腺病毒(Human adenovirus,HAd V)是一种具有高度传染性的病原体,感染后可引起急性呼吸道疾病(Acute respiratory disease,ARD)例如社区获得性肺炎。尽管免疫功能正常的成年人感染HAd V后,一般呈“流感”样症状或无明显症状,但是儿童感染HAd V后,通常会引起下呼吸道感染,甚至发展为重症肺炎,危及生命。引起儿童呼吸道感染最常见的是HAd V-B、C、E群,其中以B群的HAd V-3和HAd V-7最为常见。本文旨在提供广州地区儿童人群中腺病毒感染的临床特征和分子流行病学数据。方法:首先,针对HAd V亚型设计特异性引物,建立HAd V不同亚型的PCR分型方法;其次,收集2019年因呼吸道感染就诊于广州市妇女儿童医疗中心的患儿呼吸道样本,并全部经荧光定量PCR检测为HAd V阳性,共1203例;然后,使用型别特异性引物对样本进行PCR扩增,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后判读结果。每个亚型中随机抽取一例样本使用六邻体通用引物进行PCR扩增,扩增产物送上海生工测序,序列与各亚型参考序列通过使用MEGA 6.0构建进化树,确认分子亚型。对不同亚型HAd V的Hexon、Penton base和Fiber进行扩增,产物送上海生工测序,获得的序列与参考序列通过使用使用Bio Edit、MEGA 6.0软件进行系统发育分析,系统发育树使用i TOL在线软件进行美化。同时收集病例的临床资料,并使用spss软件对临床特征进行统计分析。结果:1203例HAd V阳性样本中,1128例(93.77%)为HAd V-B群,其中最主要流行的HAd V亚型为HAd V-7,占46.30%,其次是HAd V-3(40.57%)。HAd V与其它呼吸道病原体合并感染共286例(23.77%),其中以肺炎支原体(MP)合并感染最为常见。患儿年龄以1-3岁为主,其次是3-6岁、1岁及以下。在住院患儿中,HAd V-7是主要的流行亚型,4月-6月为感染高峰期;在门诊患者中,HAd V-3是主要的流行亚型,9月-12月为感染高峰期。对于重症住院患儿,他们的平均住院时间为24.65天,大约是轻症住院患儿的2倍(P<0.001)。与轻症住院患儿相比,重症住院患儿的AST(P<0.001)、ALT(P<0.001)和LDH(P<0.001)血清水平显著升高;白蛋白(P<0.001)、血清钙离子(P<0.001)和碱性磷酸酶(P<0.001)则明显低于轻症住院患儿。系统发育分析表明,本研究中HAd V亚型的基因组在传播过程中比较稳定,与近几年国内许多地方流行的病毒株具有非常近的亲缘关系。结论:2019年广州地区儿童人群中HAd V感染亚型主要是HAd V-7,其次是HAd V-3。1-3岁儿童是HAd V感染的主要人群。住院患儿以HAd V-7感染为主,门诊患儿以HAd V-3感染为主。HAd V感染的重症住院患儿表现为更长的住院时间、高血清水平的AST、ALT和LDH。系统发育分析表明本研究中HAd V亚型与近几年国内流行的病毒株具有非常近的亲缘关系。第二部分硒代胱氨酸体外抗人腺病毒7型作用的初步研究背景:HAd V-7是儿童是引起儿童人群呼吸道感染最常见的病原体之一,具有较高的发病率和死亡率。目前还没有针对HAd V-7的疫苗和特异性抗病毒药物可供临床使用,因此加大针对HAd V-7的抗病毒药物研究很有必要。本研究初步探索含硒化合物硒代胱氨酸抑制HAd V-7复制、增殖的作用。方法:使用rAD7EGFP(带荧光标签的HAd V-7病毒株)感染A549细胞,采用观察细胞病变效应(CPE)和病毒感染后荧光强度来判断硒代胱氨酸对HAd V-7的抑制作用;采用Western blot实验检测p53蛋白表达变化。结果:rAD7EGFP感染A549细胞72小时后,荧光倒置显微镜下观察到大量细胞呈现出绿色荧光,表明rAD7EGFP感染宿主细胞后大量复制增殖产生子代病毒;rAD7EGFP感染宿主细胞两小时后用硒代胱氨酸(2μM、4μM、8μM)处理72小时,荧光倒置显微镜下观察到细胞中绿色荧光明显减少、减弱,表明硒代胱氨酸能够有效抑制rAD7EGFP感染A549细胞。Western blot结果显示rAD7EGFP感染A549细胞后上调了细胞p53蛋白表达,rAD7EGFP感染A549细胞两小时后用硒代胱氨酸(8μM)进行处理,硒代胱氨酸(8μM)明显下调了细胞p53蛋白表达。结论:本研究初步探索硒代胱氨酸在体外细胞模型中能够明显抑制HAd V-7复制和增殖,并调节了细胞p53蛋白的表达。