Wnt信号通路能影响毛囊细胞的生成、发育、增殖与分化等作用,进而影响绒毛生长周期以及毛乳头细胞增殖,Wnt10b基因为Wnt/β-catenin信号通路中重要信号因子之一,对绒毛生长调控的研究具有重要意义;大量研究表明,褪黑素能够调控毛囊周期性生长,但其调控机理尚不清楚。本研究是在课题前期组转录组测序的基础上,筛选出受褪黑素影响的毛囊生长相关的β-catenin、FGF21、Lef1、SFRP1基因,研究通过绒山羊皮肤上皮细胞培养、Wnt10b基因干扰、qRT-PCR以及western-blot等技术检测Wnt10b基因在褪黑素调控绒毛周期生长中的作用机制。研究结果如下:(1)本研究根据添加褪黑激素浓度不同设置四个试验组,分别为对照组(0 pg/mL)、100pg/mL、300pg/mL、600pg/mL 以及 900pg/mL 处理绒山羊上皮细胞,利用cck-8法检测各组皮肤上皮细胞增殖情况。结果表明:300pg/mL褪黑素浓度对皮肤上皮细胞增殖效应最佳(P<0.05)。(2)根据山羊Wnt10b基因序列,构建三种干扰质粒片段并融入质粒载体,shRNA-Wnt10b-CDS1、Wnt10b-CDS2、Wnt10b-CDS3、Wnt10b-NC(空载体对照)成功转染至上皮细胞中,qRT-PCR结果显示Wnt10b-CDS3干扰效率最高。(3)包装构建Wnt10b干扰病毒,并将其转染至上皮细胞与褪黑素处理细胞中,GFP荧光显示,转染效率极高,并通过qRT-PCR与western-blot技术检测,两组细胞中Wnt10b基因干扰成功(P<0.01),四组细胞所得RNA与蛋白可用于后续相关基因验证试验。(4)在Wnt10b干扰成功的基础上使用qRT-PCR与western-blot技术验证四组细胞中β-catenin、FGF21、LEF1、SFRP1的基因表达量,结果显示,添加褪黑素可显著提高细胞中β-catenin、FGF21、LEF1的表达量(P<0.01),褪黑激素可能是通过这三个基因表达上调来促进绒毛周期改变;干扰上皮细胞与褪黑素处理上皮细胞中Wnt10b,可显著下调β-catenin、FGF21、LEF1与SFRP1的表达(P<0.05)。综上研究可以看出Wnt10b基因在褪黑激素调控绒毛周期生长中发挥着重要作用。