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研究背景Syndecan家族是一族跨膜蛋白聚糖,是主要的细胞表面硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(heparan sulfate proteoglycans HSPGs)。Syndecan家族有4个成员,分别为Syndecan-1、-2、-3、-4,其中以对Syndecan-1(CD138)的研究最为广泛。Syndecan-1由核心蛋白和未分支的糖胺聚糖侧链共价结合形成,是细胞间质、细胞质膜的重要组成成分,主要表达于上皮细胞和浆细胞,亦可少量表达于其他类型的细胞中。Syndecan-1主要通过其分子膜外段的硫酸乙酰肝素侧链与细胞外基质成分、生长因子、酶和酶抑制物、肝素结合生长因子等结合,以共受体方式调节细胞与微环境之间的相互作用,主要参与细胞-胞外基质粘附及细胞-细胞间粘附,组织细胞分化、黏附和增殖行为的调控,维持细胞的分化表型并抑制肿瘤生长。其表达受高度调节并具细胞类型和发育阶段的特异性。在前阶段,有关Syndecan-1的研究多集中于其与肿瘤的关系。但随着其在炎症中所起重要作用的发现,已有越来越多的学者致力于此方面的研究。目前,国外已有大量文献报道syndecan家族与炎症的关系,但与IBD的研究尚不多见。国内与炎症包括IBD等的研究尚未见报道。本研究通过临床取材,研究Syndecan-1在IBD患者肠道黏膜组织中的表达情况,初步探讨其中的可能机制,并分析其表达变化与患者的临床特点之间的关系,内容包括:1.Syndecan-1在IBD患者及正常人肠黏膜中的蛋白表达情况;2.Syndecan-1及MMP-9、TIMP-1在IBD患者及正常人肠黏膜中的mRNA表达情况:3.结合IBD患者的临床资料,分析Syndecan-1的表达情况与IBD患者临床特点之间的关系。方法1.临床取材及分组:所有组织标本均取自2006-2008年广州南方医科大学附属南方医院消化内科内镜中心内镜活检组织。所取标本分为正常对照组和IBD组。正常对照组30例,取自排除显著器质性病变且肠镜下诊断为正常肠道的健康体检者或IBS患者。IBD组65例,包括CD组23例及UC组42例,全部病例资料至少由两位消化专科医师重新复习病史和资料,统一按照2000年全国炎症性肠病学术研讨会标准(成都标准)进行诊断,同时邀请两位病理科医师复习病理切片参与诊断。所有患者均知情同意。2.采用免疫组化方法检测Syndecan-1在各组中的蛋白表达情况。3.采用逆转录-聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测Syndecan-1及MMP-9、TIMP-1在各组中的mRNA表达情况。4.对IBD患者的临床资料进行回顾性分析,并与Syndecan-1的表达情况进行比较,再行统计学分析。结果1.免疫组化结果显示,Syndecan-1蛋白在IBD组的总体表达较正常组显著增高,差异具有统计学意义(P＜0.01),而UC组与CD组无显著性差异(P＞0.05)。免疫组化染色中可见,正常组织中Syndecan-1蛋白呈现均一的上皮细胞染色。染色位于肠黏膜基底侧上皮细胞及腺体上皮细胞的膜表面。未见胞质染色。粘膜固有层和粘膜下层亦可见散在的浆细胞染色。IBD组(UC组和CD组)肠道黏膜上皮细胞及腺体上皮细胞着色则显著减弱;而间质中有大量浆细胞着色,范围较广,染色较深,较正常组织显著增强。另外,典型病变如局部脓肿、隐窝下脓肿、裂隙样溃疡处则几无着色,肉芽组织中仅有少量着色。2.RT-PCR结果显示,Syndecan-1 mRNA在IBD组中的表达与正常组之间并无显著性差异,UC组与CD组间亦无差异(P＞0.05);而MMP-9、TIMP-1 mRNA的表达则显著高于正常正常组,差异具有统计学意义(P＜0.01),UC组与CD组间无显著性差异(P＞0.05)。3.对IBD患者的临床资料进行回顾性分析,并与Syndecan-1的表达情况进行比较,进行统计学分析后发现,Syndecan-1的表达变化与患者的性别、年龄无关,但与病情、疾病分期、内镜下有无炎性息肉及光镜下的炎症程度关系密切。病情重者高于轻者,发作期高于缓解期及慢性迁延期,无炎性息肉者高于有炎性息肉者,炎症程度重者高于轻者。且Syndecan-1总体表达量越高,其炎症程度越重,在黏膜基底侧及腺体上皮细胞的染色越浅,而间质的染色则越重。所有分析结果中,UC和CD的情况均一致。结论1.在IBD患者肠道黏膜组织中,Syndecan-1的蛋白表达有显著的改变。表明在IBD的发生发展及疾病的修复中存在有Syndecan-1表达的变化,此变化可能在疾病进程中起重要作用,且在IBD的两个病种中所起的作用可能相同。2.Syndecan-1的表达在基因水平上并无改变,IBD的发生发展与Syndecan-1mRNA表达水平无关。其表达的变化发生于转录后水平。3.结肠黏膜MMP-9 mRNA高表达与IBD发生发展有关,MMP-9 mRNA的高表达可能引起TIMP-1 mRNA反馈性的增高。4.Syndecan-1的表达变化与患者的性别、年龄无关,但与病情的严重程度、病情变化、炎症程度以及组织的修复情况密切相关。Syndecan-1蛋白总体表达量越高,其上皮细胞膜的表达则越低,间质表达越高,同时其病情越重,炎症程度越重,越是需要进行组织修复。5.我们的研究均对IBD的两个病种——UC和CD分别进行分析,但各项结果均未发现两者之间存在差异。表明Syndecan-1、MMP-9、TIMP-1可能在两个病种中发挥同样的作用。