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背景与目的：肿瘤多药耐药(MDR)是导致肿瘤化疗失败的主要原因之一。MDR的形成机制复杂，其中主要机制是ATP结合盒转运蛋白(如P-gp、MRP和BCRP等)的过度表达。BCRP是新近发现的ATP结合盒转运蛋白超家族成员，在多种肿瘤中过度表达，可介导肿瘤细胞对米托蒽醌、托泊替康、柔红霉素、阿霉素、氨甲喋呤、SN38以及酪氨酸激酶抑制剂等多种化疗药物的耐受。目前，对于BCRP的转录调控了解甚少。p53是研究最为系统的肿瘤抑制基因，其突变涉及50％以上肿瘤的发生发展；野生型p53不仅在DNA损伤修复、细胞周期调控及细胞凋亡等过程中发挥着重要的作用，而且通过调控多种药物转运蛋白和其它靶基因而介导肿瘤耐药。但迄今为止，p53与BCRP的关系仍不清楚。为了进一步阐述肿瘤多药耐药机制，识别BCRP介导的药物耐受所涉及的分子靶标，揭示肿瘤发生发展与肿瘤多药耐药的内在联系，本课题拟探讨p53对BCRP的转录调控作用及可能机制。方法：通过脂质体转染技术建立野生型和突变型p53高表达细胞系，RT-PCR和Westem-blot检测BCRP和p50表达，MTT法检测米托蒽醌(Mit)和5-氟尿嘧啶(5-Fu)敏感性；采用RNAi干扰技术沉默MCF-7细胞中内源性野生型p53的表达，检测干扰前后细胞BCRP、p50的表达以及药物敏感性；通过与报告基因共转染试验检测p53对BCRP和NF-κB启动子的调节活性，观察化学抑制剂MG132或显性负突变IκBα对此调节活性的影响；通过MG132或Iκ3α抑制NF-κB活性后，观察细胞中BCRP的表达情况；通过MatInspector预测BCRP启动子上的转录因子；采用EMSA分析p53及NF-κB与BCRP启动子的结合能力。结果：野生型p53高表达细胞BCRP、p50 mRNA和蛋白表达均降低，对BCRP特异性底物Mit的敏感性增加(p＜0.05)，突变型p53高表达细胞BCRP、p50表达与药物敏感性均无明显改变；当MCF-7细胞内源性野生型p53被沉默后，细胞中BCRP和p50 mRNA和蛋白表达上调，细胞对Mit的敏感性降低；野生型p53以剂量依赖性方式抑制BCRP和NF-κB启动子活性(p＜0.05)，而突变p53的抑制作用丧失；当细胞中NF-κB活性被MGl32或显性负突变IκBα抑制后，野生型p53对BCRP启动子活性的抑制率明显降低(p＜0.05)；抑制细胞中NF-κB活性可导致BCRP表达上调；结合文献报道和生物信息学软件预测分析显示：与p53调节BCRP有关的转录因子包括：NF-Y，Sp-1和NF-κB(p50)；EMSA结果显示，p53不能与BCRP启动子结合，而NF-κB可以与位于BCRP启动子上的NF-κB(1950)结合位点结合。结论：NF-κB可能通过与BCRP启动子上的NF-κB(p50)位点结合而激活BCRP的表达；野生型p53可能通过对NF-κB(p50)表达的抑制而特异性抑制MCF-7细胞BCRP的表达并降低细胞对部分化疗药物的耐受，其活性部位包括175aa和248aa。