血细胞发育是一个错综复杂的过程,受一系列转录因子调控。目前虽然已经鉴定出一些血细胞发育转录调控因子,但仍有很多血细胞发育调控基因有待鉴定,其分子调控机制有待深入研究。斑马鱼和哺乳类造血系统的信号调控通路高度进化保守。斑马鱼以其独特的优势成为进行脊椎动物发育生物学研究的理想模式动物之一。TRIM45是我室克隆鉴定的一个与血细胞发育有关的候选基因,本文利用斑马鱼模型研究TRIM45基因的功能。loc558117基因是TRIM45在斑马鱼中的同源基因,有一个环型锌指,两个B盒型锌指,一个α-螺旋卷曲螺旋结构域。半定量RT-PCR证明敲低loc558117基因的表达,血细胞发育标志基因TRIM33、SMAD5、GATA2、BMP2B等的mRNA表达水平下调,说明loc558117与斑马鱼血细胞发育相关。利用制备的地高辛标记的loc558117反义RNA探针,分别对斑马鱼各个发育时期的胚胎进行原位杂交。分析结果表明,loc558117的mRNA在斑马鱼发育各时期均有表达。为了研究其蛋白表达,利用PCR技术扩增斑马鱼loc558117基因编码区的491bp片段,将其插入到原核表达载体pET-28a中,构建成表达重组质粒并通过IPTG诱导表达融合蛋白,经HIS柱子亲和纯化后免疫新西兰大白兔,获得兔抗loc558117多克隆抗体,Western blot检测其抗体效价为1：1000,斑马鱼组织特异性较好。Western blot结果表明,loc558117蛋白在斑马鱼胚胎发育的各时期均表达,在成年斑马鱼的血液,心脏、眼睛、卵、脑中均有表达,且在血液的表达较强烈。利用斑马鱼loc558117基因特异性的morpholino反义寡核酸敲低loc558117基因的表达,结果显示斑马鱼胚胎的血液颜色变淡,尾部弯曲,黑色素形成缓慢,围心腔增大,心脏不能正常环化等。同时制备了地高辛标记的血细胞标志基因GATA2、SMAD5和hbbe3的反义RNA探针,整体原位杂交结果表明,这些血细胞标志基因在突变体中的表达受到抑制。总之,上述结果表明,loc558117参与早期血细胞的发育。这也为进一步研究loc558117基因在血细胞发育过程中的作用机制奠定了基础。