【摘 要】
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猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2, SS2)是一种人兽共患的传染病病原,不仅可引起猪脑膜炎、关节炎、心内膜炎、败血症、肺炎和突然死亡,还可感染相关人员并致死,在
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猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2, SS2)是一种人兽共患的传染病病原,不仅可引起猪脑膜炎、关节炎、心内膜炎、败血症、肺炎和突然死亡,还可感染相关人员并致死,在我国和其他养猪业发达的国家已多次流行,对养猪业造成了巨大的经济损失。猪链球菌2型能产生多种毒力因子,如溶血素、溶菌酶释放蛋白、胞外因子等.溶血素能刺激机体产生免疫保护作用,且各型猪链球菌均能产生生化和免疫特性相似的溶血素。因此,溶血素能对各型链球菌感染产生交叉保护作用。对我国江苏及其周边地区的流行病学调查显示,来自疫区的SS2均为对猪油强毒力的MRP-EF-表现型,由此可见MRP与EF在致病过程中的重要作用.本实验对具有免疫原性的MRP-EF与SLY蛋白进行表达,以期制造出可以对猪链球菌2型进行有效预防的基因工程疫苗。将已经构建好的重组质粒pET32a-MRP-EF与pET32a-SLY转入大肠杆菌BL21中,优化诱导时间、IPTG浓度、温度等诱导条件大量表达出分子量分别约为74kD和36kD的融合蛋白,并利用亲和层析的方法纯化两种蛋白,两种蛋白免疫转印均可被SS2的抗血清识别,具有免疫原性。将纯化好的猪链球菌2型MRP-EF与SLY重组蛋白作为抗原包被_ELISA板建立检测两种免疫原产生抗体的ELISA方法。试验的最佳反应条件为：抗原包被浓度分别为1.25μg/mL和0.78μg/mL,血清1：200稀释；一抗反应时间为90min,二抗反应时间分别为60min和45min,具有较高的稳定性、特异性和敏感性。通过基因工程技术分别表达了猪链球菌2型MRP-EF与SLY两种重组蛋白,分别或1：1混合,与不同佐剂混合乳化,设立免疫剂量梯度,免疫BALB/C小鼠,并以链球菌2型全菌灭活苗作对照,二免后用SS2-1活菌攻击,并采集各组血清,间接ELISA测定效价。结果显示,试验组保护效果优于对照组；MRP-EF+SLY免疫组的保护效果优于其他试验组和对照组,其中25μg蛋白组合免疫的小鼠保护力等同于50μg蛋白组合。试验证实两种蛋白各25μg时为最佳免疫剂量.ISA佐剂效果最佳。取表达猪链球菌2型MRP-EF与SLY的两种重组菌的表达产物rMRP-EF及rSLY,分别或1：1混合,与ISA206佐剂混合乳化,免疫仔猪,并以猪链球菌2型全菌灭活苗作对照。二免后用SS2-1活菌攻击,并采集rMRP-EF/rSLY组及全菌灭活疫苗组仔猪的血清,间接ELISA测定效价。结果显示,rMRP-EF/rSLY组rMRP-EF与rSLY的抗血清效价分别均为1：12800、1：25600。rMRP/rEF及全菌灭活疫苗免疫仔猪具有较好的保护率,为80%(4/5)及100%(5/5),而rSLY保护率为60%.
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