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巨噬细胞是人类免疫系统的组成部分之一,它在抗原提成、免疫调节中发挥重要作用。其中,肿瘤相关巨噬细胞(Tumor-associated macrophages,TAMs),是一类具有M2表型的特殊的巨噬细胞,可以发挥促进细胞增殖、侵袭、转移及促血管生成等作用。大量研究已表明,表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)信号通路在上皮及肿瘤细胞中激活后可促进其增殖及恶性转化,但在巨噬细胞中EGFR信号通路对于其极化的影响尚未明确。本课题组在前期工作中已发现巨噬细胞表面EGFR的活化可影响炎症状态下细胞因子的生成,在此基础上,本研究意在探索巨噬细胞表面EGFR活化对巨噬细胞极化的调控及在其上皮细胞恶性转化中的作用。本课题研究分为以下三个部分:第一部分,白介素4(Interleukin-4,IL-4)可诱导巨噬细胞表面EGFR活化并通过活化STAT6通路(Signal Transducer and Activator of Transcription-6,STAT6)诱导巨噬细胞向M2表型极化,并且上调HB-EGF(Heparin-Binding EGF-like growth factor,HB-EGF)的分泌。抑制巨噬细胞表面EGFR活性后,以上现象均得到加强。其次,从巨噬细胞EGFR激酶缺陷的小鼠体内提取腹腔巨噬细胞,发现抑制EGFR活性或特异性敲除EGFR表达,均可上调IL-4诱导的肿瘤相关巨噬细胞的形成(M2型极化)及相关细胞因子的分泌。同时,体内诱导实验中发现巨噬细胞表面EGFR活化可以抑制其向M2型的转化。通过本部分研究证实EGFR信号通路活化可以抑制巨噬细胞向M2型极化。第二部分,在证实EGFR信号可以影响巨噬细胞极化的基础上,探讨其对于上皮细胞的恶性转化是否具有调控作用。以小鼠胃上皮细胞为模型,体外实验中发现,IL-4诱导的巨噬细胞可以通过分泌HB-EGF,通过与胃上皮细胞表面的EGFR结合从而促进上皮细胞的增殖及上皮间质转化(Epithelial Mesenchymal Transition,EMT)。此种现象在特异性敲除EGFR的胃上皮细胞中未被发现。同时,巨噬细胞表面EGFR活化后可以抑制胃上皮细胞的增殖及EMT现象。首先应用IL-4诱导的巨噬细胞条件培养基孵育胃上皮细胞(Mouse conditionally immortalized stomach epithelial cells,ImSt)及EGFR敲除的上皮细胞(Egfr-/-ImSt),发现仅正常上皮细胞出现了细胞增殖及EMT的现象。之后发现巨噬细胞EGFR功能缺陷的小鼠腹腔巨噬细胞IL-4条件培养基较对照组,可以更加明显地上调胃上皮细胞的增殖及EMT现象。可见,巨噬细胞表面EGFR活化可抑制肿瘤相关巨噬细胞对上皮细胞增殖及恶性转化的促进作用。第三部分,在第二部分工作基础上,试图以体内荷瘤的方式进一步探讨巨噬细胞表面EGFR在IL-4介导的M2型极化后,对上皮细胞增殖及EMT的影响。以导入Ras基因小鼠结肠上皮细胞(IMCEras)为模型,体外集落形成实验及体内成瘤实验发现EGFR缺陷的巨噬细胞IL-4条件培养基较正常EGFR的巨噬细胞IL-4条件培养基,可以明显上调IMCEras细胞的集落形成能力,成瘤体积、Ki-67阳性数目及百分比以及EMT水平。综上所述,可以得出如下结论:巨噬细胞表面EGFR的活化抑制了IL-4诱导的STAT6信号通路的活化以及其向M2表型的极化,进一步抑制了HB-EGF等细胞因子的合成及释放,最终抑制了上皮细胞的生长及EMT。同时,EGFR信号的活化在不同类型的细胞中(巨噬细胞vs上皮细胞/肿瘤细胞)可以产生截然不同的效果。