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研究背景及目的：慢性皮肤溃疡（Chronic skin ulcey，CSU）是一种常见的病因复杂、难治性疾病，其愈合需经历三个即相互区别又相互联系的阶段，是一个复杂而又连续的生物反应过程。在欧美国家，慢性皮肤溃疡发病率的增加及其严重性已引起人们的高度重视，其中以糖尿病性溃疡和下肢血管性溃疡为多：而我国以创伤或创伤合并感染为多，近年来，糖尿病足、血管性溃疡的发病率有上升趋势。不管是创伤还是糖尿病等其他原因引起的溃疡，局部治疗是非常重要的一种手段，但目前尚未发现满意的疗法和药物。近年来，国内外诸多学者将胰岛素用于治疗（全身用药或局部应用）各种创伤或溃疡创面，发现创面能提前愈合，起到了很好的疗效。胰岛素是一个分子量为56kD的水溶性酸性蛋白质分子，有A和B两条多肽链组成，共有三个二硫键，在等电点时具有最低溶解度。它作为一种多功能的蛋白质激素，除调节物质代谢作用外，还有促进创面修复的效应。大量研究证明，胰岛素在体外能够促进或维持细胞的增殖与分化，在体内可能是一种生长调节因子。我们在临床实践中将胰岛素混合液外敷于各种顽固性溃疡创面，均能取得满意的临床疗效，监测血糖未发现有低血糖现象，使用安全又经济。但将其制成外用制剂用于创面的实验研究在国内外则鲜见报道，因此本研究欲将其制成复方制剂、外用于溃疡创面并探讨其可能的促愈机制，为临床应用提供理论和实验依据。方法：1．按正交试验设计筛选最优化处方，以卡波姆为基质制备复方胰岛素凝胶剂，采用紫外分光光度法测定胰岛素含量变化并考察其稳定性。2．以Wistar大鼠为研究对象，依据文献复制急性创伤模型，设立复方胰岛素凝胶治疗组（A）、空白基质组（B）、阴性对照组（C），以治疗后不同时间点各组溃疡面积变化、溃疡愈合速度及组织病理学检查评价修复效果。3．以糖尿病大鼠为研究对象，依据文献复制糖尿病皮肤溃疡模型，设立复方胰岛素凝胶治疗组（A）、金因肽（重组人表皮细胞生长因子）阳性对照组（B）、阴性对照组（C），以治疗后不同时间点各组创面愈合百分率、HE染色、免疫组化染色及透射电镜分析来评价修复效果。4．统计学分析应用SPSS10.0统计软件包处理，实验数据以均数±标准差（（?）±s）表示，创面面积及创面愈合率采用重复测量方差分析（Repeated Measures），不同时间点组间比较以及每组不同时间点比较采用单因素方差分析（One-Way ANOVA）；PCNA、VEGF表达采用析因分析（Factorial analysis），不同时间点组间比较及每组不同时间点分别采用单因素方差分析（One-Way ANOVA）和t检验；组间两两比较采用LSD法，以P＜0.05为差异有显著性意义。结果：1．正交设计试验结果：表明PH对胰岛素的稳定性影响最大、卡波姆浓度次之、胰岛素浓度最小；最优化处方组成为：A381C1，即卡波姆1.5％，pH为6，胰岛素浓度14U／g。2．稳定性实验结果：发现我们研制的复方胰岛素凝胶在冰箱（4℃±3）或室温保存稳定性较好。3．药效学研究3．1急性创伤模型实验①创面面积：不同时间各处理组间有显著性差异（F=5.880，P＜0.01）；从伤后7天开始，各时间点A与B、C组比较均有显著性差异（P＜0.01或P＜0.05），而B与C组比较无显著性差异（p＞0.05）。②光镜观察：伤后7d，A组肉芽组织增生旺盛，成纤维细胞及毛细血管含量丰富；而B、C组，肉芽组织增生不如A组旺盛，成纤维细胞、毛细血管含量相对A组少。伤后14d，A组创面基本上皮化，皮肤结构完整；而B、C组创面未完全上皮化，皮肤结构不完整。3．2糖尿病皮肤溃疡模型实验①创面愈合百分率：各处理组间有显著性差异（F=8.302，P＜0.01）；致伤3天以后，各时间点各组间创面愈合百分率的比较差异均有显著性意义（P＜0.05或P＜0.01）；组间两两比较时，治疗组、阳性组与阴性组比较差异均有显著性意义（P＜0.05或P＜0.01）；而治疗组与阳性组比较差异无显著性意义（P＞0.05）。②光镜观察：伤后7天，治疗组、阳性组肉芽组织生长较活跃，其毛细血管芽胚及成纤维细胞数量显著多于阴性组对照组。伤后14天，治疗组、阳性组大部分创面已被表皮所覆盖，上皮化加快，肉芽组织生长旺盛；而阴性组残留创面较治疗组、阳性组大，上皮化慢，肉芽组织不如治疗组、阳性组丰富。伤后21天，治疗组、阳性组创面基本愈合，细胞间有大量胶原沉积，上皮层较厚，结构完整；而阴性组胶原沉积相对较少，上皮层较薄。③免疫组化观察：各处理组间有显著性差异（P＜0.05）；伤后7天，治疗组、阳性组PCNA、VEGF阳性表达率明显高于阴性组，它们之间的差异有显著性意义（均为P＜0.05）；而伤后14天，治疗组、阳性组PCNA、VEGF阳性表达率有所下降，而阴性组则上升，它们之间的差异无显著性意义（P＞0.05）。各间段治疗组与阳性组PCNA、VEGF阳性表达率的差异均无显著性意义（P＞0.05）。说明治疗组、阳性组有提前促修复细胞增殖作用。④透射电镜观察：伤后14天，治疗组、阳性组及阴性组创面组织中均有较多的成纤维细胞，细胞呈梭形，胞浆丰富。胞浆中粗面内质网、线粒体等细胞器较为丰富，说明各组的细胞代谢比较旺盛。治疗组、阳性组细胞间质内有粗大的胶原纤维形成，胶原沉积明显；而阴性组间质内胶原纤维细少，胶原沉积不明显，数目明显少于治疗组、阳性组；说明治疗组、阳性组较阴性组有提前促胶原沉积作用。结论：1．按正交试验筛选出的最优化处方为：中性胰岛素注射液140U，维生素。B128.75mg，卡波姆941 0.15g，甘油1.0g，三乙醇胺适量调节PH至6.0～6.5，加蒸馏水至10g。2．该制剂处方设计合理，制备工艺简单，稳定性好，对皮肤无刺激性，测定方法快速而准确。3．复方胰岛素凝胶能使血管内皮细胞、成纤维细胞、上皮细胞等修复细胞增殖、分裂、分化能力增强，加快肉芽组织生长，提前上皮化，从而加速溃疡创面愈合，在创伤愈合的三个时期均具有促修复效应。