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目的:本研究旨在探讨XIAP基因及蛋白水平在腺样囊性癌不同细胞株中的表达变化,及其对人腺样囊性癌细胞凋亡的影响。 方法: 1细胞传代和鉴定 选取人腺样囊性癌肺高转移潜能和低转移潜能的细胞株,细胞复苏后传代培养,利用倒置显微镜观察不同细胞株的形态学差异,利用免疫组化染色(EMA CEA)鉴定细胞株; 2细胞周期分析、凋亡指数分析和XIAP蛋白表达检测采用流式细胞术方法检测培养12h、24h、36h、48h、60h、72h时间节点的细胞凋亡指数、细胞周期分布曲线,同时检测XIAP蛋白在两种细胞株中的表达情况。 3采用逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)法检测XIAPmRNA在两种腺样囊性癌细胞株中传代培养12h、24h、36h、48h、60h、72h时间节点的表达差异,利用激光扫描后经Quantity ONE(BIO-RAD)软件对目的基因进行光密度相对定量分析比较。 结果: 1不同肺转移细胞株中均存在CEA、EMA的共同表达,同时证明两种细胞株的传代培养成功;高肺转移细胞株中两者的阳性细胞比率为84.33%±6.77%和82.88%±5.26%,在低肺转移细胞株中的阳性细胞比率分别为88.84%±7.27%和80.84%±6.16%,两种指标在不同细胞株中的阳性率比较差别无统计学意义(P>0.05);高肺转移细胞株呈梭形排列,粘附性较差,随传代时间的延长,细胞异型性更加明显、且梭形变较突出;低转移细胞株呈圆形或卵圆形,细胞粘附性强,体积较小,呈片状分布,细胞异型性不明显。 2高肺转移细胞株的细胞凋亡指数在12-72h呈稳定的低水平,平均11.4%±0.5%,6个时间节点的凋亡指数经统计学分析无明显差别(P>0.05);低转移组细胞凋亡指数在6个时间节点呈明显的高水平,平均为36.5%±5.2%,且各个节点比较无明显差别(P>0.05);低转移组细胞凋亡指数高于高肺转移组,两组差别有统计学意义(P<0.05);高肺转移细胞株G1、G2、S期的细胞比值分别为54.25%±4.45%、6.4%±1.35%和39.22%±4.55%;低转移细胞株的细胞比值分别为76.4%±8.45%,4.1%±0.24%和19.8%±6.23%;统计分析显示:高转移细胞株G1期比率明显低于低转移细胞株(P<0.05); G2期比率在两组细胞株间差异无统计学意义(P>0.05);S期比率在高转移细胞株明显高于低转移细胞株(P<0.05)。高转移细胞株XIAP蛋白的阳性表达率为48.4%±5.34%,低转移组为24.6%±4.12%,高转移细胞株明显高于低转移细胞株,差别有统计学意义(P<0.05)。(3)RT-PCR扩增结果显示:XIAPmRNA在两种细胞株中的不同时间节点均存在表达,且高转移性腺样囊性癌细胞株中六个不同培养时间节点均存在高表达,表达水平无明显差别(P>0.05);而在低转移组细胞株中呈一致的低水平表达,6个时间节点表达水平差别无统计学意义(P>0.05);两种细胞株的mRNA表达水平间比较差别具有统计学意义(P<0.05)。 结论: 1不同转移潜能的腺样囊性癌细胞株在形态学方面存在一定的差异,高肺转移细胞株粘附性差,且梭形变明显,这可能是造成其具有不同转移潜能的结构基础; 2高肺转移细胞株的凋亡指数高表达XIAP蛋白,且其凋亡明显受到抑制,细胞周期S期比例明显升高;低肺转移细胞株凋亡无明显影响;细胞周期的G期占明显优势。 3两组细胞株都存在XIAPmRNA基因的表达,在12-72h之间高肺转移细胞株高水平表达,低肺转移株低水平表达该基因,该基因导致的细胞凋亡抑制可能是肺转移潜能差异的关键因素。