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【背景】结直肠癌(colorectal cancer,CRC)是临床常见的恶性肿瘤,严重威胁着人类的健康和生命。目前CRC的病因仍未明确,其可能由于环境与遗传因素长期交互作用而诱发。白细胞分化抗原147(cluster of differentiation 147,CD147),又名细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(extracellular matrix metalloproteinase inducer,EMMPRIN)、basigin(BSG),是一种广泛存在于细胞表面的跨膜糖蛋白,参与机体多种生理和病理过程。本课题组前期研究证实CD147在CRC组织和细胞株中表达显著增高,通过RNA干扰CD147的表达能够明显抑制肿瘤细胞的增殖、侵袭及转移能力,提示CD147在CRC的发生发展过程中发挥着重要的作用,然而其详细的调控机制仍有待深入探讨。微小RNA(microRNA,miRNA)是由约22个核苷酸组成的非编码单链小分子RNA,它通过抑制或降解特定靶基因信使RNA(messenger RNA,mRNA),在转录后水平调控基因的表达。鉴于CD147在CRC发生发展中的重要作用及miRNA对靶基因的调控作用,我们通过三种预测软件miRanda,TargetScan和miRDB预测出miR-485-5p可能调控CD147的表达,而miRNA-485-5p在多种肿瘤如口腔鳞状细胞癌、黑色素瘤、肺腺癌、胃癌、乳腺癌等中被报道为抗癌基因,但其在结直肠癌中的功能尚未见报道。因此,本研究旨在探讨miR-485-5p是否影响结直肠癌细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡等及其可能的调控机制。【目的】本研究旨在探讨miR-485-5p在结直肠癌中的表达水平及其对结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡等表型的影响并验证CD147是否为miR-485-5p的靶基因。【方法】1.CD147相互作用miRNAs的筛选:以BSG基因为检索词,利用三种预测软件miRanda,TargetScan和miRDB预测出可能调控CD147的上游miRNA;2.运用实时荧光定量PCR法(realtime fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)检测miR-485-5p在2种结直肠癌细胞株(DLD-1、SW480)及正常人类肠黏膜上皮细胞(FHC)中的表达,以及该miRNA和CD147在41例CRC组织及对应癌旁组织中的表达水平;3.通过转染miR-485-5p mimic建立miR-485-5p过表达结直肠癌细胞;4.CCK-8实验、Transwell实验及流式细胞术分别检测miR-485-5p对细胞增殖、迁移和侵袭及凋亡能力的影响;5.建立结直肠癌细胞裸鼠皮下移植瘤模型,多点注射miR-485-5p agomir及miR-485-5p agomir-NC,观察过表达miR-485-5p对结直肠癌细胞在裸鼠体内成瘤能力的影响;6.miR-485-5p和CD147在结直肠癌组织中的表达相关性分析采用Spearman相关性分析;7.双荧光素酶报告基因系统、qRT-PCR、Western blot以及挽救实验验证miR-485-5p靶向调控CD147。【结果】1.三种预测软件miRanda,TargetScan和miRDB预测出miR-485-5p可能调控CD147的表达;2.与正常肠粘膜上皮细胞FHC及配对的癌旁组织相比,miR-485-5p在结直肠癌细胞系和组织中低表达,差异有统计学意义;3.转染miR-485-5p mimic可以显著上调结直肠癌细胞中miR-485-5p的表达水平;4.实验性上调miR-485-5p可抑制CRC细胞系的增殖、迁移和侵袭能力,并促进细胞凋亡;5.在裸鼠体内,多点注射miR-485-5p agomir可以抑制结直肠癌细胞SW480的成瘤能力;6.利用Spearman双变量相关分析,分析结直肠癌组织中miR-485-5p与CD147表达的关系,我们发现二者的表达呈负相关,表明CD147可能为miR-485-5p的下游靶基因;7.双荧光素酶报告基因检测显示,miR-485-5p过表达可以抑制野生型荧光素酶活性,但对突变型没有影响,证实miR-485-5p可与CD147的3’端非编码区(3’untranslated region,3’UTR)部分结合;转染miR-485-5p mimic,上调miR-485-5p在结直肠癌细胞中的表达后,qRT-PCR和Western blot均检测到CD147下调;裸鼠移植瘤免疫组织化学染色结果亦显示,与miR-485-5p agomir-NC组肿瘤组织中CD147的高表达相比,miR-485-5p agomir组的肿瘤组织中CD147蛋白表达降低。这些发现均表明CD147和miR-485-5p之间显著负相关,miR-485-5p可以与CD147 3’UTR区特异性结合。挽救实验数据表明,过表达CD147可以部分恢复miR-485-5p对结直肠癌细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡等生物学功能的影响。【结论】在结直肠癌中,miR-485-5p发挥了抑癌基因的功能,可通过CD147抑制结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力并促进细胞凋亡,具有作为基因治疗的潜在价值。