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核酸疫苗是九十年代发展起来的一种新型疫苗,经肌肉注射或皮肤基因枪接种,可诱导机体产生细胞免疫和体液免疫,该疫苗无任何毒副作用,是一种与传统疫苗截然不同的新型疫苗,被誉为第三代疫苗。新城疫(ND)和传染性支气管炎(IB)一直是危害我国养禽业的两大重要病毒性传染病。虽然预防这两种疫病的弱毒疫苗早已研制成功并得到广泛应用,但是由于受母源抗体等因素的干扰,常常发生免疫失败。为了探索一种能够不受母源抗体干扰,可在1日龄进行基础免疫接种、缩短或消除雏鸡免疫空白期的新型疫苗,用于预防ND和IB,以保障养鸡业的健康发展,本论文进行了有关NDV和IBV核酸疫苗的研究。 为了研究NDV核酸疫苗的免疫功效,本论文首先通过PCR方法自含NDV Z株F基因的阳性质粒中扩增了F基因,然后将其插入到真核表达载体pcDNA3.1/V5-His-TOPO中,阳性克隆经PCR扩增和核酸内切酶酶切鉴定准确无误,核酸序列测定结果与原始基因比较,同源性>99%,启始密码子和终止密码子未出现变异,将该重组质粒命名为pcDNANDVZF。将pcDNANDVZF在脂质体作用下转染CEF细胞,用间接免疫荧光试验(IFA)检测,结果证明pcDNANDVZF可在CEF细胞中大量表达F蛋白。将pcDNANDVZF(即NDV核酸疫苗)采用肌注法以不同的剂量分别免疫小鼠、1日龄SPF雏鸡和1日龄商品代雏鸡,进行动物免疫和攻毒保护试验,结果表明NDV核酸疫苗具有良好的免疫效果。 为了研究IBV核酸疫苗的免疫功效。将通过PCR方法扩增的IBV Z株S1基因插入到真核表达载体pcDNA3.1/V5-His-TOPO中,构建了真核表达质粒pcDNAIBVZS1。在脂质体作用下将阳性重组质粒pcDNAIBVZS1转染CEF细胞,用IFA检测,在CEF细胞中可见有大量S1蛋白表达。将pcDNAIBVZS1(即IBV核酸疫苗)分别肌注免疫小鼠、1日龄SPF雏鸡和1日龄商品代雏鸡,进行动物免疫和攻毒保护试验,结果表明IBV核酸疫苗具有很好的免疫功效。