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《中华人民共和国食品卫生法》规定了允许使用的食品着色剂的种类及使用方法。继“苏丹红事件”之后,国家加大了对苏丹红染料违规使用的惩处。一些生产商为了自身利益,将注意力转移到用其它化工染料对食品进行着色。碱性菊橙、碱性玫瑰精和碱性嫩黄O和碱性桃红都是工业用化工染料而非食品添加剂,这类化工染料用于食品着色会带来一定的安全隐患,直接危害消费者的健康。本研究建立了高效液相色谱(HPLC)法同时测定食品中碱性菊橙、碱性玫瑰精和碱性嫩黄O的方法。实验考察了不同流动相体系、流动相配比、乙酸铵浓度、柱温、流速、进样量等因素对分离的影响,确定了最佳色谱条件：ZORBAX SB-C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm)；二极管阵列检测器,碱性菊橙、碱性玫瑰精和碱性嫩黄O的最佳检测波长分别为410nm、550nm和435 nm；色谱柱温度30℃,以甲醇-0.015 mol/L乙酸铵(85：15,v/v)为流动相；流速0.9 mL/min,进样量10μL。在最佳色谱条件下,建立了各物质的标准曲线,相关系数r均为0.9999；碱性菊橙、碱性玫瑰精和碱性嫩黄O的检出限分别为0.05 mg/kg、0.02 mg/kg和0.1 mg/kg。样品的加标回收率均在84.5-104.5%,方法相对标准偏差在2.5%以内,实现了4 min内对3种化合物的同时测定。本研究还建立了测定食品中碱性桃红的高效液相色谱法。考察了流动相配比、缓冲溶液pH值、柱温、流速、进样量等因素对分离的影响,确定了最佳色谱条件：迪马公司C18色谱柱(4.6 mmi.d.×150 mm,5μm);二极管阵列检测器,检测波长为520 nm；色谱柱温度30℃,以甲醇-乙酸铵(2：98,v/v)为流动相,流速为0.9 mL/min,进样量2.0μL。在最佳实验条件下,绘制碱性桃红的标准曲线,线性范围为0.320～80.00μg/mL,线性方程为y=184.34x+115.67,相关系数为r=0.9990。方法检出限为0.1mg/kg,相对标准偏差为1.9%,加标平均回收率为97.4%。研究结果表明,本实验所建立的测定食品中碱性菊橙、碱性玫瑰精、碱性嫩黄O和碱性桃红染料的高效液相色谱法,具有操作简单,快速、准确、重现性好、检出限低的特点。