【摘 要】
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[目的]观察三氧预处理对大鼠肺缺血再灌注损伤细胞的形态学及其功能的影响。[方法]将30只SD大鼠(雌雄混合,400-500g)随机分为3组:三氧预处理组(O3+I/R组,n=10)、缺血再灌注组
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[目的]观察三氧预处理对大鼠肺缺血再灌注损伤细胞的形态学及其功能的影响。[方法]将30只SD大鼠(雌雄混合,400-500g)随机分为3组:三氧预处理组(O3+I/R组,n=10)、缺血再灌注组(I/R组,n=10)和假手术组(S组,n=10)。三氧预处理组每天固定时间点行腹腔注射医用三氧气体(三氧浓度为50ug/ml,1mg/kg/d),连续注射7天。缺血再灌注组和假手术组于对应时间注射体积相同(ml)的氧气。所有实验大鼠麻醉后,颈部气管插管,接呼吸机,开胸后,分离左肺门,假手术组游离肺门后仅穿线不结扎,不再进行多余操作。O3+I/R、I/R组:游离肺门后,用4-0丝线双活结结扎肺门40 min,再灌注100 min。灌注完成后,心脏放血法处死大鼠。用注射器抽取预冷至4℃的PBS缓冲液,进行肺泡灌洗,缓慢、反复灌洗2-3次,间隔不超过2分钟,待回抽得到肺泡灌洗液,完成建模。实验结束后,取出大鼠肺组织,取2*2*2mm肺组织置于锇酸保存液中固定用于电镜观察,取部分肺组织用于测定肺湿干比重、elisa法测量ros浓度,检测LDH活性,pink1基因的表达,剩余部分放置入冰箱中冷冻保存。[结果]与假手术组相比,三氧预处理组、缺血再灌注组W/D值均较大(P<0.05);其中,三氧预处理组、缺血再灌注组相比,缺血再灌注组的W/D值,明显大于三氧预处理组(P<0.05)。与假手术组进行比较,缺血再灌注组、三氧预处理组ROS含量明显升高(P<0.05);缺血再灌注组与三氧预处理组相比ROS含量升高(P<0.05)。与假手术组进行比较,缺血再灌注组、三氧预处理组LDH活性明显升高(P<0.05);缺血再灌注组与三氧预处理组相比LDH活性升高(P<0.05)。缺血再灌注组中,组织细胞的线粒体部分嵴消失,体积增大,部分细胞呈空泡样变,微绒毛减少较多,且细胞内存在大量自噬小体,部分上皮细胞溶解,缺血再灌注组中,组织细胞的线粒体部分嵴消失,体积增大,部分细胞呈空泡样变,微绒毛减少较多,且细胞内存在大量自噬小体,部分上皮细胞溶解,空泡样改变的细胞明显较少,,与假手术组相比,三氧预处理组、缺血再灌注组总rna值均较大(P<0.05);用2-△CT法分析Q-PCR的结果三氧预处理组、缺血再灌注组相比>1,其中三氧预处理组、缺血再灌注组相比,缺血预处理组的总rna值较大,但P=0.64>0.05,无统计学意义。可能与灌注时间的长短有关,需进一步完善实验。[结论]三氧预处理能明显减轻肺缺血再灌注损伤对肺组织的损伤,其机制可能是将机体暴露于短暂、多次的氧化应激反应中,预先激活机体抗氧化应激系统,当机体遭遇氧化应激反应时,通过清除机体过多的ROS,从而减轻炎症反应。三氧预处理可以通过预先激活机体抗氧化应激系统从而对大鼠缺血再灌注损伤组织起保护作用。三氧预处理可以减轻缺血再灌注的肺组织的炎症程度、水肿情况。三氧预处理可以改善缺氧情况.
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