【摘 要】
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目的:1.通过构建CVB3诱导的病毒性心肌炎小鼠模型,检测小鼠心肌中细胞焦亡相关分子,了解病毒性心肌炎小鼠心肌中细胞焦亡分子水平;2.通过检测CVB3诱导的病毒性心肌炎小鼠心肌中mi R-223水平,初步探讨mi R-223在CVB3诱导的病毒性心肌炎小鼠心肌细胞焦亡中的作用。方法:1.CVB3病毒性心肌炎小鼠模型的建立1.1选用BALB/c小鼠30只,随机分为对照组（Normal组）和病毒性心肌
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目的:1.通过构建CVB3诱导的病毒性心肌炎小鼠模型,检测小鼠心肌中细胞焦亡相关分子,了解病毒性心肌炎小鼠心肌中细胞焦亡分子水平;2.通过检测CVB3诱导的病毒性心肌炎小鼠心肌中mi R-223水平,初步探讨mi R-223在CVB3诱导的病毒性心肌炎小鼠心肌细胞焦亡中的作用。方法:1.CVB3病毒性心肌炎小鼠模型的建立1.1选用BALB/c小鼠30只,随机分为对照组（Normal组）和病毒性心肌炎组（CVB3组）,每组15只,CVB3组小鼠腹腔注射0.1ml含10~5TCID50的CVB3,对照组腹腔注射等量的PBS。每天观察小鼠一般情况,有无出现卷缩、活动减少、扎堆,对刺激不敏感等情况。连续观察7天,记录小鼠体重变化以及小鼠生存状况。1.2小鼠腹腔注射CVB3后的第7天,通过眼内眦采血,采用ELISA法检测各组小鼠血清心肌肌钙蛋白I（cardiac troponin,c Tn I）水平。1.3小鼠腹腔注射CVB3后的第7天,处死小鼠提取心肌组织标本,常规4%多聚甲醛固定、脱水、石蜡包埋后切片,进行HE染色,观察各组心肌组织病理变化情况。通过对小鼠体重变化,生存率情况,小鼠血清c Tn I水平以及心肌组织病理情况来判断CVB3诱导的病毒性心肌炎小鼠模型是否构建成功。2.CVB3病毒性心肌炎小鼠的细胞焦亡相关分子检测小鼠腹腔注射CVB3后的第7天,通过眼内眦采血用于ELISA检测,取液氮保存的心肌组织用于q RT-PCR,Western blot检测。2.1小鼠腹腔注射CVB3后的第7天,通过q RT-PCR方法检测对照组与CVB3组小鼠心肌中NLRP3及caspase-1m RNA的表达水平。2.2小鼠腹腔注射CVB3后的第7天,通过Western blot检测对照组与CVB3组小鼠心肌中caspase-1/pro-caspase-1的比值的变化。2.3小鼠腹腔注射CVB3后的第7天,通过ELISA检测对照组与CVB3组小鼠血清IL-1β水平的变化。3.CVB3病毒性心肌炎小鼠的mi R-223检测小鼠腹腔注射CVB3后的第7天,通过q RT-PCR方法检测对照组与CVB3组小鼠心肌中mi R-223表达水平。结果:1.CVB3病毒性心肌炎小鼠模型的建立1.1 CVB3组小鼠第3天开始出现卷缩、活动减少、扎堆,对刺激不敏感等症状;对照组小鼠体重自第1天开始起逐渐增加,CVB3组小鼠体重从第3天开始下降,并一直持续到第7天。1.2小鼠感染CVB3后7天内的生存情况:对照组小鼠生存率100%,CVB3组小鼠从第2天开始死亡,到第7天生存率为47%。1.3通过ELISA检测各组小鼠血清c Tn I水平结果显示,CVB3组小鼠血清中c Tn I的水平较对照组显著增加,差异具有统计学意义（P<0.05）。1.4 HE染色镜下显示:CVB3组小鼠心肌纤维排列紊乱,心肌细胞水肿,心肌间质中有炎性细胞的浸润。对照组小鼠心肌细胞排列规则,无炎性细胞浸润。2.CVB3病毒性心肌炎小鼠的细胞焦亡相关分子检测结果2.1各组小鼠心肌中NLRP3及caspase-1m RNA表达水平:CVB3组小鼠心肌中NL RP3及caspase-1 m RNA表达量较对照组显著增加,差异具有统计学意义（P<0.05）。2.2各组小鼠心肌中caspase-1/pro-caspase-1的比值:CVB3组小鼠心肌中caspase-1/pro-caspase-1的比值较对照组明显增加,差异具有统计学意义（P<0.05）。2.3各组小鼠血清IL-1β水平:CVB3组小鼠血清中IL-1β的水平较对照组显著增加,差异具有统计学意义（P<0.05）。3.CVB3病毒性心肌炎小鼠的mi R-223检测结果通过q RT-PCR检测各组小鼠心肌的mi R-223表达水平,CVB3组小鼠心肌中mi R-223表达量较对照组明显降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:1.通过对BALB/c小鼠腹腔注射CVB3,成功构建CVB3病毒性心肌炎小鼠模型;2.CVB3病毒性心肌炎小鼠心肌中细胞焦亡相关分子水平升高;3.CVB3病毒性心肌炎小鼠心肌中mi R-223水平降低,mi R-223可能参与CVB3病毒性心肌炎小鼠心肌中细胞焦亡的调控。
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