重组质粒pchIL-18-MAGE转染树突状细胞疫苗体外杀伤肝癌细胞的研究

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目的:肝癌是临床上常见的恶性肿瘤之一,采用手术、化疗及放疗等传统的治疗方法尽管显示一定的治疗效果,但仍存在预后较差,易转移复发,生存率较低的问题。树突状细胞是众所周知的唯一能激活初始型T淋巴细胞的抗原递呈细胞,在肿瘤生物治疗中起到了重要作用,因此被广泛应用制备各种肿瘤疫苗。MAGE-1是MAGE家族成员之一,MAGE-1在正常组织中不表达(除睾丸和胎盘外),而在黑色素瘤和其它多种恶性肿瘤中均有不同程度表达,尤其在肝癌中高表达;IL-18是一种具有多种生物学活性的细胞因子,能够促进NK细胞的增殖和活化,诱导NK细胞分泌IFN-γ,可通过对IFN-γ和GM-CSF的诱导作用,促进MHCⅠ类分子的表达。因此IL-18可作为免疫佐剂增强疫苗的免疫效果。本实验研究构建肿瘤相关抗原基因MAGE-1和细胞因子IL-18的重组质粒pcIL-18、pcMAGE-1和其共表达质粒pchIL-18-MAGE,将质粒转染DC中制备DC疫苗,以期促进NK细胞的增殖与活化,非特异性的杀伤肿瘤细胞;促进DC的成熟,有效的将抗原提呈给T细胞,更大地激发特异性的抗肿瘤免疫反应,靶向性杀伤肿瘤细胞。方法:构建共表达质粒pchIL-18-MAGE,体外培养树突状细胞,将以上重组质粒转染树突状细胞。RT-PCR和Western blot验证基因在DC中的表达。用流式细胞仪检测转染后DC细胞表型。经过转染DC刺激的淋巴细胞作为效应细胞,未转染DC刺激淋巴细胞和单纯淋巴细胞为对照,检测靶细胞体外杀伤作用。ELISA法检测INF-γ分泌。结果:培养后,经显微镜和电镜观察,可见悬浮样生长的细胞呈树突样;PT-PCR和Western blot鉴定,可见IL-18和MAGE-1基因在DC细胞中的表达;转染前、后DC细胞表面标志差异明显;转染DC与未转染DC均具有很强的刺激淋巴细胞增殖的能力;各转染组与未转染组比较,无论淋巴细胞增殖及IFN-γ产生能力均有显著性差异;pchIL-18-MAGE转染后DC细胞高表达DC83、CD1a、CD86、CD80、HLA-DR等抗原,表现为成熟DC表型特征。共表达质粒转染的DC细胞诱导的CTL对肝癌细胞杀伤作用最强。结论:pchIL-18-MAGE转染DC细胞对MAGE-1+肝癌细胞杀伤作用明显。
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