滇西亚种树鼩微卫星筛选及群体多态性分析

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树鼩,攀鼩目,灵长类动物近亲,在生物、医药研究上呈现出广泛的应用前景。目前国际上使用最多的实验用树鼩是滇西亚种,被用于建立各种疾病模型,但其遗传质量控制存在诸多着问题,10年前已发表的论文使用的实验用树鼩多来自于野生型,遗传背景不清晰,遗传质量不能保证,导致许多实验结果的重复性和科学性差,因此,实验用树鼩的遗传质量控制对于其在生命科学研究和生物医药研究领域中的应用具有重大的必要性和科学意义。但是,目前报道的树鼩微卫星位点较少,需要找到更多的新位点,建立人工繁殖树鼩种群的遗传控制检测技术和标准,并对其现有的树鼩种群进行群体多态性分析。我们从树鼩全基因组序列中筛选出约700个微卫星位点,择优选出约100个位点设计引物,经过筛选,最后保留33对引物,从文献报道的引物中选取13对,一共46对引物对滇西亚种树鼩DNA进行PCR扩增,根据琼脂糖电泳和聚丙烯酰胺电泳结果筛选保留,最终筛选出滇西亚种树鼩微卫星位点22个,这22个位点均有清晰条带。随机选取F1代树鼩,15雄,15雌,共30只作为样本,用筛选出的22个新的微卫星位点作为检测位点做STR扫描。研究结果表明:(1)从文献报道中一共选取引物13对,经过筛选最终保留6对,其中普通树鼩位点中选取7个,3个可用;印度小树鼩位点中选取3个,1个可用;中缅树鼩的位点中选取3个,2个可用。TG4位点在野生普通树鼩中期望杂合度为0.76,本实验中杂合度为0.3;TG22位点在野生普通树鼩中期望杂合度为0.93,本实验中杂合度为0.37,JS188位点在野生平原树鼩和大树鼩中期望杂合度分别为0.77和0.63,本实验中杂合度为0.56,SKTg22位点在野生平原树鼩和大树鼩中期望杂合度分别为为0.90和0.76,本实验中杂合度为0.53。(2)树鼩群体STR扫描结果,22个新位点中,因为部分引物荧光信号弱,最终仅使用16个微卫星位点做群体多态性分析,这16个位点的等位基因数从2~15不等,平均等位数6.375,基因片段大小在123-432bp之间,多态信息含量在0.1-0.9之间,期望杂合度(He)的平均值为0.6138,香隆指数平均值为1.265。分析以上数据表明:(1)微卫星位点在不同种树鼩之间不完全通用,寻找适用于滇西亚种的微卫星分子标记是必要的。(2)本研究中的树鼩与野生型其他种树鼩比较群多态性低,推测原因可能是:a.不同种树鼩的种间差异。b.所测种群为F1代导致多态性下降。(3)所测群体遗传多样性水平属于高度多态。筛选的16个新的微卫星位点具有较高的多态性信息,适用于滇西亚种树鼩的遗传检测,可以为树鼩种群的遗传质量监测提供科学依据。
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