【摘 要】
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目的:利用野生型、单纯型及综合征型突变EDA1（Ectodysplasin-A1）质粒转染小鼠成釉细胞系LS8,研究先天缺牙EDA1突变对小鼠成釉细胞系LS8的凋亡、迁移、黏附等生物学行为的影响,为突变EDA1导致先天缺牙的致病机制研究提供新的理论依据。方法:本实验利用野生型EDA1-WT、单纯型EDA1-A259E、EDA1-S374R、综合征型EDA1-H252L质粒转染LS8细胞,共分六组,
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目的:利用野生型、单纯型及综合征型突变EDA1（Ectodysplasin-A1）质粒转染小鼠成釉细胞系LS8,研究先天缺牙EDA1突变对小鼠成釉细胞系LS8的凋亡、迁移、黏附等生物学行为的影响,为突变EDA1导致先天缺牙的致病机制研究提供新的理论依据。方法:本实验利用野生型EDA1-WT、单纯型EDA1-A259E、EDA1-S374R、综合征型EDA1-H252L质粒转染LS8细胞,共分六组,野生型WT（EDA1-WT）组、单纯型NSTA-1（EDA1-A259E）组、单纯型NSTA-2（EDA1-S374R）组、综合征型XLHED（EDA1-H252L）组、LS8细胞转染空载体质粒p CR3作为对照（Control）组,不转染为空白对照（Blank）组。利用FITC Annexin V-PI双染法通过流式细胞技术检测细胞凋亡影响,通过划痕实验分析细胞迁移影响,利用CCK-8法分析细胞黏附影响。结果采用Graphpad Prism 8.0.1和SPSS21.0软件进行统计分析,多个独立样本单因素方差分析或多个独立样本非参数秩和检验来分析各组差异,以α=0.05,P<0.05为检验标准。结果:1.利用FITC Annexin V-PI荧光双染色,流式细胞技术检测突变EDA1对凋亡的影响。结果显示:野生型EDA1下调LS8的凋亡率32.2%,但野生型、单纯型及综合征型EDA1蛋白对LS8细胞凋亡,各组间差异无统计学意义（P>0.05）。2.利用划痕实验检测突变EDA1对迁移的影响。EDA1-WT、EDA1-NSTA（EDA1-A259E,EDA1-S374R）、EDA1-XLHED、p CR3转染LS8细胞,结果显示在6小时,WT组与NSTA-1、NSTA-2组、XLHED组、Control组及Blank组比较,WT组LS8细胞迁移能力显著性增加（约32.1%）（P<0.05）;12、24小时,WT组比其他各组迁移率分别提高19.0%、23.7%,但差异无统计学意义（P>0.05）。3.利用CCK-8法检测突变EDA1对细胞黏附的影响。结果显示:与单纯型和综合征型EDA1比较,野生型EDA1上调细胞黏附率约24.9%,但野生型、单纯型及综合征型EDA1蛋白对LS8细胞的黏附率各组间未见差异无统计学意义（P>0.05）;单纯型突变组与综合征型突变组间LS8细胞黏附率差异无统计学意义（P>0.05）。结论:1.野生型EDA1及单纯型、综合征型突变EDA1对LS8细胞凋亡均未见影响。2.划痕6小时,野生型EDA1促进LS8细胞迁移,而突变型则丧失促进细胞迁移的能力。12小时、24小时,野生型EDA1与突变各组EDA1、各对照组间的细胞迁移率无显著性差异。3.野生型EDA1及单纯型、综合征型突变EDA1对LS8细胞黏附均未见影响。
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