【摘 要】
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目的:间充质干细胞（Mesenchymal stem cells,MSC）在治疗急性移植物抗宿主病（Acute graft versus host disease,a GVHD）中的潜在作用备受关注。本研究目的是为了验证EGF能够增强骨髓间充质干细胞治疗a GVHD的功效,并初步探索其生物学机制。方法:对受鼠进行全身放射处理后,输注供鼠骨髓和淋巴细胞以构建a GVHD小鼠模型。从BALB/c小鼠的
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目的:间充质干细胞（Mesenchymal stem cells,MSC）在治疗急性移植物抗宿主病（Acute graft versus host disease,a GVHD）中的潜在作用备受关注。本研究目的是为了验证EGF能够增强骨髓间充质干细胞治疗a GVHD的功效,并初步探索其生物学机制。方法:对受鼠进行全身放射处理后,输注供鼠骨髓和淋巴细胞以构建a GVHD小鼠模型。从BALB/c小鼠的骨髓中分离培养获取BMSCs。采用仅输注BMSCs或输注BMSCs后给予EGF的方法治疗a GVHD小鼠。观察并记录小鼠体重变化、生存时间,采用Cook的小鼠a GVHD症状评分标准评估小鼠症状,使用CM-Dil染料染色供鼠淋巴细胞,在a GVHD靶器官的组织切片中观察淋巴细胞浸润情况,使用苏木精伊红染色观察a GVHD靶器官的组织切片的病理情况,使用ELISA检测小鼠外周血中IFN-γ浓度并使用流式细胞术检测小鼠外周血中Treg细胞Foxp3表达。在体外使用Ed U染色观察EGF对BMSCs增殖能力的影响,使用Transwell方法验证EGF对BMSCs侵袭和迁移能力的作用。RT-qPCR和Western-blot用于分析EGF对BMSCs中miR-21表达和c-jun磷酸化的影响,进一步采用双荧光素酶报告基因验证c-jun对miR-21启动子的作用。结果:EGF能够增强BMSCs治疗a GVHD的功效,表现为小鼠体重变化减轻、Cook的a GVHD评分降低、生存期延长、外周血炎症因子IFN-γ浓度降低、靶器官中供鼠淋巴细胞浸润减少、a GVHD组织学证据减弱。在输注BMSCs并给予EGF的小鼠中,外周血EGF对外周血Treg细胞的Foxp3的表达具有正向的影响。同时,体外实验发现EGF增强了BMSCs的增殖、迁移、侵袭能力。在功能学实验中,我们发现EGF能够促进BMSCs的c-jun磷酸化及miR-21表达,双荧光素酶报告基因实验证实了c-jun增强miR-21启动子活性。结论:EGF通过促进BMSC中c-jun磷酸化,增加其miR-21表达,进而增强其免疫调节活性和增殖、归巢能力。输注BMSCs同时给予EGF能够显著改善小鼠a GVHD。总之,EGF能够增强BMSC治疗a GVHD的功效。
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