【摘 要】
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目的三叉神经痛（trigeminal neuralgia,TN）是一种以阵发性、电击样痛为特征的慢性口面部疼痛综合征。TN发病机制尚未明确,目前缺乏针对TN发病机制的有效干预手段。Neuroligin-2（NL2）是一类分布于神经系统的细胞黏附分子,可调控星形胶质细胞形状和突触发生。星形胶质细胞对TN发病起重要作用,但星形胶质细胞中的NL2在TN中的表达和功能尚未被研究。本研究首先观察NL2在大鼠
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目的三叉神经痛（trigeminal neuralgia,TN）是一种以阵发性、电击样痛为特征的慢性口面部疼痛综合征。TN发病机制尚未明确,目前缺乏针对TN发病机制的有效干预手段。Neuroligin-2（NL2）是一类分布于神经系统的细胞黏附分子,可调控星形胶质细胞形状和突触发生。星形胶质细胞对TN发病起重要作用,但星形胶质细胞中的NL2在TN中的表达和功能尚未被研究。本研究首先观察NL2在大鼠三叉神经根区（trigeminal root entry zone,TREZ）星形胶质细胞中的表达。并且构建TN动物模型,分析NL2与TN发病的相关性。最后通过体内沉默NL2表达,探讨NL2对TN发生发展的影响,为TN的靶点治疗提供理论基础和科学依据。方法1.通过对大鼠TREZ区慢性压迫,构建三叉神经痛动物模型。成年雄性SD大鼠随机分为5组:假手术组、三叉神经根压迫TN组、TN+NL2-sh RNA组（TN+NL2特异性sh RNA）、TN+Ctl-sh RNA组（TN+阴性对照sh RNA组）、TN+PBS组（TN+药物溶剂对照组）。采用Von Frey丝测定大鼠术前及术后口面部机械性痛阈。2.运用免疫组织化学和Western blotting方法,在术后7,14,21,28天,检测星形胶质细胞特异性标记物胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、NL2蛋白、EGFP在大鼠TREZ区中表达情况及变化趋势。3.培养TN动物模型TREZ区原代星形胶质细胞。运用GFAP免疫组织化学染色,结合DAPI进行核复染,计数原代培养星形胶质细胞的纯度。4.构建NL2-sh RNA干扰慢病毒载体,稳定沉默大鼠TREZ区星形胶质细胞中的NL2。5.分析沉默NL2的TN动物模型机械痛阈改变,探讨NL2对TN发病的影响。结果1.与假手术相比,TN组大鼠在术后第14天到28天,机械痛敏感（p<0.05）。2.TN组大鼠TREZ区GFAP免疫阳性星形胶质细胞显著增加,NL2免疫阳性与GFAP共定位,蛋白表达水平与GFAP一致。3.TREZ区星形胶质细胞原代培养结果显示,星形胶质细胞的纯度达95%以上。4.大鼠NL2-sh RNA干扰慢病毒载体的构建及鉴定。5.TN组大鼠通过sh RNA干扰后,口面部机械痛阈值升高（p<0.05）。结论大鼠三叉神经根慢性压迫损伤后,GFAP及NL2表达增加,在TREZ区局部阻断NL2表达,可以显著缓解TN大鼠的口面部机械性痛觉,提示星形胶质细胞活化及NL2在TN发病机制中可能发挥了促进周围痛觉敏化的作用。
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