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Micro RNA(miRNA)是一类长度约为18-25个核苷酸(nt)的内源性的非编码RNA,已有的研究表明,大量的miRNA参与了骨骼肌发育的调控。乌冉克羊是内蒙古地区经过长期选育形成的优良肉脂兼用型绵羊。为探讨miRNA对乌冉克羊骨骼肌发育的调控作用,本研究利用高通量测序技术对不同生长发育阶段乌冉克羊股二头肌的miRNA和mRNA的表达谱进行了检测,并对miRNA和mRNA的测序结果进行了联合分析,选取富集于骨骼肌发育相关生物学过程和信号通路中的差异miRNA及其差异靶基因,构建miRNA–靶基因互作网络图。筛选出部分与骨骼肌发育相关的miRNA,对其在乌冉克羊不同组织中的表达量进行了测定。同时,对筛选miRNA的前体基因多态性与绵羊生长性状的相关性进行了分析。主要结果如下:1.本研究构建了胎儿期(A1,A2,A3)、出生后3月龄(B1,B2,B3)和15月龄(C1,C2,C3)乌冉克羊股二头肌的小RNA文库,采用高通量测序技术对miRNA的表达谱进行了测定。通过与mi RBase v21.0数据库比对,共获得1,195个miRNA,其中988个miRNA可以比对到哺乳动物的735个miRNA前体序列,鉴定为已知miRNA,其余207个为新miRNA。对三个生长发育阶段miRNA的表达谱进行两两比较分析,在3月龄vs胎儿期比较组中获得474个差异miRNA(213个上调和261个下调),在15月龄vs胎儿期比较组中获得461个差异miRNA(186个上调和275个下调),在15月龄vs 3月龄比较组中获得54个差异miRNA(8个上调和46个下调)。选取9个差异表达的miRNA对测序结果进行验证,RT-qPCR结果与测序结果基本一致,证实了miRNA测序结果的可靠性。2.采用高通量测序技术对乌冉克羊股二头肌的mRNA表达谱进行测定,在9个mRNA文库中共检测到24,959个基因。同一样本中不同基因的表达水平差异很大,91.3%的基因表达量低于15 FPKM。对三个生长发育阶段mRNA的表达谱进行两两比较分析,在3月龄vs胎儿期比较组中获得6,783个差异基因(749个上调和6,034个下调),在15月龄vs胎儿期比较组中获得7,407个差异基因(795个上调和6,612个下调),在15月龄vs 3月龄比较组中获得78个差异基因(36个上调和42个下调)。选取7个差异表达的基因对测序结果进行验证,RT-qPCR结果与测序结果基本一致,证实了mRNA测序结果的可靠性。3.采用Target Scan和mi Randa两种算法预测差异表达miRNA的靶基因,然后与mRNA表达谱结合,筛选差异miRNA对应的差异靶基因。结果显示,在3月龄vs胎儿期比较组中有7,075个负调控的miRNA–mRNA关系对(包括382个差异miRNA和479个差异靶基因),在15月龄vs胎儿期比较组中有7,003个负调控的miRNA–mRNA关系对(包括374个差异miRNA和519个差异靶基因),在15月龄vs 3月龄比较组中仅有22个负调控的miRNA–mRNA关系对(包括19个差异miRNA和8个差异靶基因)。GO和KEGG富集分析表明,差异靶基因显著富集于与肌肉发育有关的生物学过程中(P<0.05),如细胞增殖、细胞分化、细胞分裂和肌管分化等。在3月龄vs胎儿期和15月龄vs胎儿期比较组中,差异靶基因的通路富集结果较为相近,Notch信号通路的富集最为显著(P<0.05),PI3K-Akt信号通路中参与的差异靶基因最多,但无显著性差异(P>0.05)。在15月龄vs 3月龄比较组中,差异靶基因显著富集在核糖体通路中(P<0.05)。4.采用茎环RT-qPCR对筛选的8个miRNA在乌冉克羊不同组织中的表达量进行分析。结果显示,oar-mi R-133、oar-mi R-299-5p和oar-mi R-1185-5p在骨骼肌中的表达水平较高。其中,oar-mi R-133和oar-mi R-299-5p在三个发育阶段骨骼肌中的表达量均高于其它组织。5.采用直接测序法对筛选的8个miRNA前体序列在乌冉克羊、杜泊羊和萨福克羊群体中的多态性进行了分析。结果显示,在其中的5个miRNA前体序列中共检测到8个突变,突变位点均位于miRNA前体的上、下游侧翼序列,多态信息含量在三个绵羊品种中的分布有所不同;其中,oar-mi R-133、oar-mi R-27a、oar-mi R-29a_R+1和oar-mi R-370-3p_R-2前体基因的多态性与绵羊部分生长性状存在显著相关性。本研究基于乌冉克羊不同生长发育阶段股二头肌中miRNA和mRNA表达谱的联合分析,筛选出与骨骼肌发育相关的miRNA,并揭示了筛选miRNA在乌冉克羊不同生长发育阶段的组织表达谱及其前体多态性,为阐明miRNA在乌冉克羊骨骼肌发育中的生物功能奠定基础。