溴氰菊酯(DLT)是一种拟除虫菊酯类低毒性农药,遍及农业和家庭害虫防治领域。DLT有拟雌激素活性,是一种环境内分泌干扰物,长期低剂量暴露会产生生殖毒性。卵巢作为雌性哺乳动物主要的生殖和内分泌器官,其主要功能是分泌甾体激素和排卵,这些过程受到卵泡发育的密切调控。研究报道DLT对昆虫卵巢有毒性作用,但还没有关于DLT影响哺乳动物卵巢功能的相关报道,因此本研究探讨了 DLT对大鼠卵巢内卵泡发育和甾体激素合成的影响。我们首先对青春前期的雌性SD大鼠进行为期7天的0、6.25和12.50mg/kg/d的DLT灌胃处理,收集卵巢后观测发现DLT处理引起卵巢质量显著下降,大小也明显减少。卵泡由卵母细胞、颗粒细胞和膜细胞构成,按照发育状况分为原始卵泡、初级卵泡、窦前卵泡和窦卵泡四个阶段。我们进行卵巢切片及HE染色发现,相较于对照组,DLT处理组原始卵泡、初级卵泡和总卵泡的数量没有发生显著性变化,而窦前卵泡数量增加的同时窦卵泡数量减少了,这提示DLT抑制了窦前卵泡向窦卵泡的发育。抗苗勒氏管激素(AMH)是一种能够抑制卵泡募集的旁分泌因子,有研究显示AMH可以抑制窦前卵泡向窦卵泡的发育,我们利用免疫组化染色法检测了卵巢组织中AMH的表达水平,发现相较于对照组,DLT处理组AMH的表达量剂量依赖性显著增加,提示DLT可能通过上调AMH的表达来抑制窦前卵泡向窦卵泡的发育。雌激素和孕激素是卵巢内主要的甾体激素,对于卵泡发育和雌性正常的生殖功能具有重要意义。雌二醇是女性生殖系统中活性最强的雌激素,孕酮是孕激素的主要活性形式。我们用电化学发光法检测了大鼠血清中雌二醇和孕酮的分泌量,发现DLT处理组的雌二醇水平显著升高,孕酮水平显著降低。随后Western印迹法检测发现卵巢组织中甾体激素合成三种关键酶,包括甾体激素合成急性调节蛋白(StAR)、胆固醇侧链裂解酶(P450scc)及芳香化酶的表达量均显著增加。为进一步探究DLT对颗粒细胞中甾体激素合成的影响,我们分离了青春前期雌性SD大鼠的原代颗粒细胞,用0、100、200和300μM的DLT处理48小时后,用CCK-8比色法检测了 DLT处理后的原代颗粒细胞活力,发现随着DLT处理浓度的升高,颗粒细胞的活力剂量依赖性显著升高。用电化学发光法检测细胞上清中雌二醇和孕酮的分泌量,发现DLT处理后雌二醇水平显著升高,孕酮水平没有显著性差异。随后用Western印迹法检测了颗粒细胞中StAR、P450scc及芳香化酶的表达情况,发现DLT处理均显著增加了 StAR、P450scc和芳香化酶的表达量。研究报道沉默信息调控子1(Sirt1)可以促进孕酮和雌二醇的合成及其关键酶StAR和芳香化酶的表达,抑制颗粒细胞的凋亡。我们用Western印迹法检测了 DLT暴露后卵巢组织和原代颗粒细胞中Sirtl的表达情况,发现Sirtl的表达量剂量依赖性显著增加。综上所述,利用青春前期大鼠和原代颗粒细胞模型,我们发现DLT急性暴露抑制窦前卵泡向窦卵泡的发育,改变甾体激素合成,其机制可能与上调AMH及甾体激素合成关键酶StAR、P450scc和芳香化酶的表达有关。