论文部分内容阅读
目的:本研究旨在探索C14orf119基因外周血mRNA表达水平、以及C14orf119基因3’非编码区（3’Untranslated Region,3’UTR）rs12400（C>T）、rs6736（A>T）多态性位点与中国汉族人缺血性脑卒中易感性及其相关临床危险因素的关联,并初步探索C14orf119基因rs6736（A>T）多态性对C14orf119基因与miRNA结合的影响。方法:采用病例-对照的研究方法,纳入774例缺血性脑卒中病例、793例对照。运用实时荧光定量聚合酶链式反应（Quantitative Real-time Polymerase Chain Reaction,qRT-PCR）实验技术,测定研究对象外周血C14orf119基因mRNA表达水平。采用Sequenom MassARRAY技术对C14orf119基因rs12400、rs6736多态性进行基因分型检测。采用双荧光素酶报告基因实验,在人肾上皮细胞系（Human Embryonic Kidney 293 cells,HEK293T）中探索C14orf119基因3’UTR rs6736多态性对C14orf119基因与miRNA-7-1结合的影响。结果:1.C14orf119基因表达水平:缺血性脑卒中病例组的C14orf119基因外周血mRNA相对表达量显著高于对照组（t=2.235,P=0.030）。2.C14orf119基因3’UTR多态性与缺血性脑卒中的关联:（1）哈-温平衡（Hardy-Weinberg Equilibrium,HWE）检验结果显示:C14orf119基因rs12400多态性(PHWE=0.510)、rs6736多态性(PHWE=1.000)在对照组中的基因型频率分布均符合HWE平衡。（2）C14orf119基因3’UTR多态性与缺血性脑卒中遗传易感性的关联分析:C14orf119基因rs6736多态性的基因型频率在病例组与对照组之间的分布差异具有统计学意义（总体:?2=6.402,P=0.041;女性:?2=6.196,P=0.045）,而C14orf119基因rs12400多态性的基因型频率在病例组与对照组之间的分布差异无统计学意义。多因素logistic回归分析结果显示,C14orf119基因rs6736多态性与缺血性脑卒中易感性的遗传关联具有统计学意义[显性模型:OR（95%CI）=0.755（0.606?0.940）,P=0.012;共显1模型:OR（95%CI）=1.340（1.060?1.694）,P=0.014;等位模型:OR（95%CI）=0.865（0.751?0.997）,P=0.046];校正性别、年龄后,rs6736多态性与缺血性脑卒中发生风险的关联仍具有统计学意义[显性模型:ORadj（95%CI）=0.758（0.609?0.945）,Padj=0.014;共显1模型:ORadj（95%CI）=1.329（1.051?1.681）,Padj=0.018];而C14orf119基因rs12400多态性与缺血性脑卒中发生风险的关联无统计学意义（各遗传模型所有P>0.05）。C14orf119基因rs12400、rs6736多态性完全连锁不平衡,rs12400-rs6736单体型C-T、C-A均与缺血性脑卒中的发生风险显著关联（所有P<0.05）。（3）C14orf119基因多态性位点与缺血性脑卒中临床相关危险因素的关联分析:（1）总体样本:C14orf119基因rs12400、rs6736多态性与缺血性脑卒中患者的血压（SBP、DBP）、血糖（FPG、F2hPG）、血脂（TC、TG、HDL、LDL、VLDL、APOA1、APOB）、凝血功能（PLA、PT、INR、PTA、APTT、TT、FBG）以及其他（CRP、D-D、HCY、UA）临床指标均无显著相关性（所有P>0.050）;（2）按性别分层分析:在男性样本中,C14orf119基因rs6736多态性与男性缺血性脑卒中患者纤维蛋白原（FBG）存在显著负相关[加性模型:β（95%CI）=-0.148（-0.290?-0.005）,P=0.043;βadj（95%CI）=-0.143（-0.285?-0.002）,Padj=0.047],而C14orf119基因rs12400多态性与男性缺血性脑卒中患者的血压（SBP、DBP）、血糖（FPG、F2hPG）、血脂（TC、TG、HDL、LDL、VLDL、APOA1、APOB）、凝血功能（PLA、PT、INR、PTA、APTT、TT、FBG）以及其他（CRP、D-D、HCY、UA）临床指标均无显著相关性（所有P>0.050）。在女性样本中,C14orf119基因rs12400多态性与缺血性脑卒中患者餐后2h血糖（F2hPG）[隐性模型:β（95%CI）=-6.306（-11.060?-1.556）,P=0.012;βadj（95%CI）=-6.701（-11.580?-1.820）,Padj=0.010]以及凝血酶时间（TT）[隐性模型:β（95%CI）=-1.845（-3.086?-0.604）,P=0.004;βadj（95%CI）=-1.838（-3.081?-0.595）,Padj=0.004]均存在显著负相关,而C14orf119基因rs6736多态性与缺血性脑卒中患者血压（SBP、DBP）、血糖（FPG、F2hPG）、血脂（TC、TG、HDL、LDL、VLDL、APOA1、APOB）、凝血功能（PLA、PT、INR、PTA、APTT、TT、FBG）以及其他（CRP、D-D、HCY、UA）临床指标的相关性均无统计学意义（所有P>0.050）。3.双荧光素酶报告基因实验:与空白对照（3’UTR-NC+miRNA-7-1）组相比,C14orf119基因rs6736野生型（3’UTR-WT+miRNA-7-1）组的相对荧光强度显著下降（P<0.001）,而突变型（3’UTR-MU+miRNA-7-1）组的相对荧光强度回升与空白对照无显著差别（P=0.703）,说明当rs6736多态性为A位点时miRNA-7-1与C14orf119靶向结合,表现为相对荧光强度的显著下降。结论:1.C14orf119基因的外周血mRNA表达可能与缺血性脑卒中的发生相关;2.C14orf119基因rs6736多态性可能影响中国汉族人群缺血性脑卒中的发生风险,并且rs6736的突变可影响C14orf119基因与miRNA-7-1的结合;3.C14orf119基因遗传多态性可能影响男性中国汉族缺血性脑卒中的凝血相关病理过程,并可能影响女性缺血性脑卒中的血糖代谢和凝血功能。