狂犬病是由狂犬病毒引起的一种严重侵害大脑中枢神经的重要人畜共患传染病,一旦发病,死亡率几乎是100％。据世界卫生组织报道,全世界每年因狂犬病导致的死亡人数为5～6万人,而绝大多数疫情出现在发展中国家,其中主要在亚洲和非洲。我国在世界上属狂犬病高发地区,发病和死亡人数仅次于印度,居世界第二位。　　 引起狂犬病的病原是狂犬病病毒。它属于弹状病毒科、狂犬病毒属,为单链、负股的RNA病毒;狂犬病毒有5段基因分别编码5种结构蛋白,分别为核蛋白、糖蛋白、磷蛋白、基质蛋白和转录酶大蛋白。单克隆抗体具有高度特异性、均一性、高效性和无限供应性等特点,在狂犬病的检测、诊断、治疗以及狂犬病毒抗原表位分布及抗原变异等方面发挥着越来越重要的作用.本研究的目的是获得一组稳定、特异、高效的单克隆抗体,并以此建立狂犬病病毒检测方法.　　 本研究首先以醋酸锌沉淀狂犬病毒细胞培养上清,然后蔗糖密度梯度离心,收取病毒。经测定,病毒蛋白的含量可达到大约8.7mg.ml-1。以纯化的狂犬病病毒按照每只50ug的剂量免疫Balb/c小鼠,共免疫三次,检测合格后,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经间接ELISA和IFA筛选、多次融合、培养、筛选和亚克隆等程序后,我们获得了8株具有高特异性、高效价且稳定的抗狂犬病毒的单克隆抗体,分别为:1G8、4G11、4C1、4E1、3A2、3B4、6C4和8D4,其中1G8、4G11两株杂交瘤细胞培养上清效价分别为1∶512和1∶256,小鼠腹水效价分别为2.4×104和3.6×104。用BCA试剂盒方法测定两株纯化腹水的蛋白含量分别为1.78 mg/ml和1.00 mg/ml,二者的亚类分别为IgG2a和IgG2b,其余株待测（正在制备腹水）。ELISA和IFA结果显示,2株单抗均为抗狂犬病病毒糖蛋白的特异性单克隆抗体.经过中和试验测定,1G8和4G11具有中和活性。相加ELISA试验表明,两株单抗识别不同的抗原表位。　　 我们成功地对单克隆抗体1G8株进行了荧光素(FITC)的标记,用1G8制备的荧光抗体对感染RV3天的BHK21细胞进行染色观察,结果表明,荧光抗体具有很好的特异性,染色效价为1∶400。因此,获得的单克隆抗体可用作狂犬病病毒抗原检测的诊断试剂。