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研究Ⅰ高迁移率族蛋白B1在肝细胞癌中的表达改变目的:观察高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在肝细胞癌(HCC)组织中基因表达、蛋白表达及组织细胞内分布的改变,分析HCC患者血清HMGB1水平的变化及其与甲胎蛋白(AFP)之间的相关性,探讨HMGB1在肝细胞癌发生发展中的作用。方法:收集30例健康体检者及28例HCC患者术前血清,采用酶联免疫吸附实验定量检测HMGB1、甲胎蛋白(AFP)含量水平。13例HCC组织及其癌旁组织中HMGB1mRNA和蛋白表达水平分别使用实时荧光定量RT-PCR和免疫印迹法进行检测。组织免疫荧光定位分析组织细胞内HMGB1分布的变化。结果:HCC患者术前血清HMGB1水平[(19.3±7.2)ng/ml]明显高于健康体检对照者[(4.1±1.6)ng/ml,P<0.01],且与血清AFP水平成正相关(r=0.632, P<0.01)。HCC组织中HMGB1mRNA和蛋白表达水平均显著高于其癌旁组织(P<0.01),且HCC组织细胞中HMGB1分布出现核浆转位。结论:肝细胞癌组织及血清中HMGB1表达水平均增强,HMGB1检测对肝细胞癌的实验诊断有较好的价值。研究Ⅱ肝癌细胞高迁移率族蛋白B1释放及其机制目的:研究缺氧对肝癌细胞高迁移率族蛋白B1(HMGB1)释放的诱导作用,并初步探讨其胞内信号转导机制。方法:本实验选用人正常肝细胞株QSG-7701和人肝癌细胞株SMMC-7721,通过酶联免疫吸附法、流式细胞仪检测、实时荧光定量RT-PCR和细胞免疫荧光实验,观察缺氧(1%O2)培养3-24h后对细胞培养上清液中HMGB1蛋白含量、基因表达和胞内分布的影响。使用MAPK信号通路抑制剂SB203580(5μmol/L)、SP600125(20μmol/L)和PD98059(20μmol/L)探讨缺氧诱导HMGB1释放的分子信号机制。结果:QSG-7701和SMMC-7721细胞经缺氧(1%02)培养后,3h即见HMGBl mRNA表达增强及培养上清液中HMGB1含量升高(P<0.01),同时SMMC-7721细胞6h后改变更为显著(P<0.01)。SMMC-7721细胞经缺氧培养12h后,HMGB1核浆分布发生明显改变,胞外HMGB1蛋白释放表达量升高。MAPK信号通路抑制剂SB203580、SP600125和PD98059对缺氧(1%O2)培养24h后培养上清液中的HMGB1含量均显示不同程度的抑制作用(P<0.05),尤以SP600125作用最为显著(P<0.01)。结论:缺氧能诱导肝癌细胞表达、释放HMGB1,其诱导HMGB1释放机制与MAPK信号通路有关。