【摘 要】
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2017年，一种新型α冠状病毒在我国广东养殖场出现，该病毒感染猪并引起腹泻，导致很高的小猪死亡率。该新病毒被命名为GDS04(也称为SeACoV)，全基因组分析显示，猪冠状病毒GDS04和蝙蝠冠状病毒HKU2亲缘关系密切，可能由HKU2跨物种传播而来。冠状病毒核衣壳蛋白(Nucleocapsid，N)是高表达蛋白，已知多种冠状病毒的N蛋白有调节宿主免疫应答、增强病毒感染和致病的能力，同时N蛋白也是冠状病毒的重要检测靶点。为此，本研究的目的是制备GDS04病毒N蛋白抗体用于病毒诊断，同时研究N蛋白是否参与调
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2017年，一种新型α冠状病毒在我国广东养殖场出现，该病毒感染猪并引起腹泻，导致很高的小猪死亡率。该新病毒被命名为GDS04(也称为SeACoV)，全基因组分析显示，猪冠状病毒GDS04和蝙蝠冠状病毒HKU2亲缘关系密切，可能由HKU2跨物种传播而来。冠状病毒核衣壳蛋白(Nucleocapsid，N)是高表达蛋白，已知多种冠状病毒的N蛋白有调节宿主免疫应答、增强病毒感染和致病的能力，同时N蛋白也是冠状病毒的重要检测靶点。为此，本研究的目的是制备GDS04病毒N蛋白抗体用于病毒诊断，同时研究N蛋白是否参与调控宿主干扰素产生。
根据已发表的猪冠状病毒GDS04及蝙蝠冠状病毒HKU2基因组序列，构建GDS04和HKU2的N基因全长真核和原核重组蛋白表达载体。在293T细胞中表达GDS04和HKU2的N蛋白，利用双荧光素酶报告系统，探究GDS04和HKU2的N蛋白是否调节宿主先天免疫。利用qRT-PCR和双荧光素酶报告实验确认GDS04和HKU2的N蛋白是否抑制下游ISG表达。同时在大肠杆菌中利用IPTG诱导表达重组N蛋白，通过镍柱进行纯化，利用佐剂乳化重组蛋白免疫小鼠。
研究结果证实，在293T、Hela、和A549细胞中GDS04和HKU2的N蛋白均能高水平表达而且表达的N蛋白能抑制I型干扰素表达，以及抑制下游的ISG54的生成，但是对NF-κB信号通路则没有影响。成功表达和纯化了N基因重组蛋白，并获得了小鼠多克隆抗体，抗N蛋白血清的效价很高，可以用于GDS04和HKU2的N蛋白的ELSIA和Wester-blot检测。
本研究初步揭示了猪新型α冠状病毒GDS04及相关蝙蝠冠状病毒HKU2的N蛋白具有调节宿主免疫应答的功能，能显著抑制宿主I型干扰素通路。制备的高效价抗血清可用于N蛋白的Western-blot和ELISA检测。研究结果为后续的GDS04冠状病毒及相近病毒检测、致病和种间传播机制研究提供了参考借鉴。
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