【摘 要】
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目的:本研究旨在研究PTEN基因敲降后结肠癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力的改变以及对结肠癌肿瘤环境中巨噬细胞极化的影响。方法:1.用实时荧光定量多聚核苷酸链式反应（RT-q PCR）测定组织及细胞中的PTEN、TNF-α,IL-1β、i NOS、Arg-1、CD206、CD163表达量。2.蛋白质印迹法（Western blot）检测PTEN、p-p38、p38、JNK、AP-1、Bcl2、Bax、
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目的:本研究旨在研究PTEN基因敲降后结肠癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力的改变以及对结肠癌肿瘤环境中巨噬细胞极化的影响。方法:1.用实时荧光定量多聚核苷酸链式反应（RT-q PCR）测定组织及细胞中的PTEN、TNF-α,IL-1β、i NOS、Arg-1、CD206、CD163表达量。2.蛋白质印迹法（Western blot）检测PTEN、p-p38、p38、JNK、AP-1、Bcl2、Bax、Caspase-3、Arg-1、CD163和CD206的蛋白表达量。RT-q PCR验证PTEN是否被成功敲降。3.用噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖。4.细胞侵袭迁移实验（Transwell）评估细胞迁移、侵袭能力;5.细胞共培养诱导人髓系白血病单核细胞（THP1）分别极化为M1和M2型巨噬细胞;用流式细胞术（Flow Cyto Metry,FCM）检测M1或M2双阳性细胞的数量。结果:1.结肠癌组织和细胞中p-p38、JNK、AP-1、Bcl2蛋白的表达明显高于癌旁组织或CCD-18Co细胞,PTEN、Bax和Caspase-3的表达则相反;结肠癌组织中Arg-1、CD163和CD206分子和蛋白质的表达水平明显高于癌旁组织;2.PTEN基因敲降后SW620细胞的增殖、迁移和侵袭能力增强;3.PTEN基因的敲降在分子水平上降低了THP-1细胞的TNF-α、IL-1β和i NOS的表达,增加了Arg-1、CD206、CD163的表达;4.PTEN基因的敲降提高了M2/M1、Arg-1/i NOS的比例。结论:通过敲降PTEN基因可促进了结肠癌的进展。这一过程可能与结肠癌肿瘤环境中诱导巨噬细胞M2型的极化有关。这提示了一种影响结肠癌的潜在机制,可能为结肠癌提供一种新的治疗策略。
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