TBX5基因启动子区域突变、甲基化分析及相互作用蛋白研究目的先天性心脏病(congenital heart disease，CHD)是常见的出生缺陷，发病率为4％～8％。临床资料和流行病学研究表明，遗传因素在CHD的发病过程中发挥重要作用，遗传率为55％～65％。因此，从分子水平上研究控制心脏发育的相关基因，对于探讨心脏病变的机制及探索人类遗传性心脏病的治疗方案及手段具有重要意义。TBX5是近几年发现的、在心脏发育过程中起重要作用的一个转录因子。TBX5基因于1997年在Holt-Oram综合征(HOS)中首次被克隆。HOS，又称心手综合征，属于常染色体显性遗传病，患者表现为以房间隔缺损(ASD)为主的心脏异常和上肢不同部位、不同程度的畸形。国内外许多研究已证实TBX5基因突变将导致HOS的发生，但该基因突变或表达异常是否会导致人类单纯性CHD还未见相关报道。我室前期研究结果表明在人类单纯性先天性心脏病患者中TBX5基因表达有下降趋势，但未发现其编码区存在突变，所以本实验对TBX5基因上游1200bp的调控区进行了突变和启动子区的甲基化筛查，同时应用免疫共沉淀方法钓取了与TBX5相互作用的蛋白质，为单纯性先天性心脏病的病因学研究及深入理解人类胚胎心脏发育的过程奠定了基础。方法1．变性高效液相色谱(DHPLC)方法筛查TBX5基因调控序列突对100例人类单纯性先天性心脏病患者进行了TBX5基因转录起始点上游1200b调控序列的突变筛查。2．甲基化敏感性限制性内切酶法检测TBX5基因启动子区甲基化情况应用Methprimer软件预测到TBX5基因启动子区存在两个CpG岛，选择两个CpG岛都存在的CGCG位点进行甲基化检测。分别设计两对引物，应用限制性内切酶BstuⅠ对CG↓CG位点的识别特性对50例人类单纯性先天性心脏病患者进行甲基化检测。3．应用免疫共沉淀方法钓取孕20周心肌组织中与TBX5相互作用的蛋白质提取孕20周引产胎儿心肌组织的核蛋白，利用TBX5抗体钓取其相互作用的蛋白质。结果1．突变筛查结果在100例单纯性先天性心脏病患者中未发现TBX5调控序列的突变。2．启动子区甲基化检测结果5例正常人和50例单纯性先天性心脏病患者心肌组织中TBX5基因启动子区两个CpG岛中的两个位点均存在甲基化。3．免疫共沉淀钓取与TBX5相互作用的蛋白质在孕20周胎儿心肌组织核蛋白质中钓取了1个与TBX5相互作用的蛋白质，经质谱分析鉴定为肌球蛋白重链β亚单位(MYH7)。结论1．TBX5基因启动子区域突变、甲基化可能不是引起单纯性CHD患者TBX5表达下调的原因。2．TBX5与肌球蛋白重链β亚单位(MYH7)在心脏发育过程中存在相互作用，并可能参与CHD的发生。