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芽孢杆菌由于其能产生多种抗植物病原真菌的脂肽类抗生素等化合物而成为生物防治领域研究的热点,且芽孢杆菌多为安全菌株,在植物病原真菌的防治上具有良好的应用前景。海洋由于其独特的生态环境,使海洋微生物产生了与陆地微生物不同的代谢系统和防御体系,特别是从海洋微生物中提取的生物活性物质,常常具有新颖的化学结构和特异的生理功能。所以针对海洋来源的芽孢杆菌进行筛选,提取针对植物病原真菌的抗生素有着重要的研究意义和应用价值。
本论文从保存的112株深海来源的芽孢菌中,通过抗菌活性测定、液体石蜡排油圈法、甲苯乳化实验、粗脂肽产率分析及HPLC分析,筛选到一株有良好抗菌活性和高代谢物产率的芽孢杆菌SH-B74。选取多种植物病原真菌,采用平板对峙法,滤纸片加样量为20微升,对其进行的测定结果表明,该菌的代谢产物具有广谱抗真菌活性。
对该菌经液态发酵产生的脂肽类化合物进行分离纯化,结合酸沉淀、FlashChromatography、SPE、HPLC等技术手段,分离得到了4个纯化合物。其中的化合物A通过LC-MS-MS、1H-NMR和13C.NMR测定,结合相关文献的数据,鉴定为已知化合物bacillopeptinA。化合物B、C、D则被鉴定为fengcins类脂肽化合物。
采用菌株形态观察、生理生化试验和分子生物学鉴定技术相结合的方法,将菌株SH-B74鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。