干扰素(Interferon，IFN)是一种由细胞分泌的活性糖蛋白，具有抗病毒、免疫调节和抗肿瘤的作用。α干扰素(Interferon alpha，IFN-α)主要由单核吞噬细胞产生，是天然免疫和获得性免疫的桥梁，可以激活NK细胞的细胞毒性并促进其增殖，调节机体免疫机能。它具有抗病毒作用，既可以与疫苗配合使用，增强免疫效果，也可以单独使用，提高动物的免疫机能，治疗病毒性疾病。犬α干扰素具有广谱抗病毒活性，能够治疗犬瘟热、犬细小病毒病、犬病毒性肝炎等高致死性病毒病，并辅助肿瘤治疗，其良好的应用前景吸引了众多研究者。Hiummler等(1987)首先开始了犬干扰素基因的研究。我国科研工作者于上世纪末开始犬干扰素的研究工作。我国的夏春等(1999)克隆了拉布拉多犬和德国牧羊犬的IFN-α基因序列；后来又有人在大肠杆菌中表达了CaIFN-α，用稀释法复性、凝胶柱层析纯化，获得了高活性的CaIFN-α(王艳等，2005)。曹瑞兵等(2008)实现了CaIFN-α1在毕赤酵母系统中的分泌表达，得出酵母分泌表达的CaIFN-α1具有较高的抗病毒活性。本研究在对犬α干扰素基因优化的基础上，进行了克隆、表达及表达产物抗病毒活性研究。　　本研究利用毕赤酵母分泌型表达载体pPICZαC，表达了犬IFN-α成熟蛋白基因，根据酵母系统密码子的偏嗜性，下载GenBank己登录的犬α干扰素基因序列，在不改变氨基酸的前提下对成熟蛋白基因核苷酸序列进行密码子偏嗜性改造，然后送往上海英俊生物有限公司人工合成序列。同时设计了含KpnI和EcoRI酶切位点的一对引物，采取聚合酶链式反应(PCR)法，以人工合成的DNA为模板进行了IFN-α基因的扩增。PCR产物经纯化回收后，克隆到pMD18-Simple T载体上。将重组质粒pMD18-IFNα和载体pPICZαC质粒分别用KpnI和EcoRI双酶切，分别回收目的片段，连接回收的基因，然后转化到大肠杆菌DH5a，成功构建了重组表达质粒pPICZαC-IFNα。经酶切和测序鉴定，IFN-α成熟蛋白基因片段已正确插入到表达载体pPICZαC中，加入的保证对框的碱基“C”也被插入正确位置。用Sac I线性化质粒pPICZαC-IFNα，利用电击法将重组质粒导入工程菌X33，然后涂布YPDS+ZeocinTM平板，温箱30℃培养3～5天后，平板上长出一些单菌落。提高zeocin浓度3到5倍，筛选出高抗性的转化子。先用BMGY培养基对重组菌进行激活培养，24h后离收集菌体，用BMMY重悬诱导表达干扰素。在诱导过程中每24小时添加一次甲醇，保持其终浓度为1.0％，诱导表达96小时后，收集上清液。取少量上清液进行SDS-PAGE电泳分析。对重组表达的干扰素采用非洲绿猴肾细胞(Vero)-水疱性口炎病毒(VSV)系统以细胞病变抑制法为基础来测定其效价，同样方法测定了表达产物对PRV和CDV的抑制作用。用4周龄的SPF昆明小鼠确定重组干扰素的毒性作用，以及对PRV病毒在动物体内的抑制和治疗作用。　　本次实验构建了高表达的重组酵母菌，实现了犬α干扰素在酵母中的高表达，SDS检测大小约为24ku，比预测分子量大，推测其发生了糖基化。表达产物具有较强的种属特异性，在Vero细胞上对PRV具有较高的抗病毒活性，达到了3.6×107 U/L，对CDV也有很好的抑制作用。表达量高达到58 mg/L，在小鼠实验过程中，证明重组干扰素对预防和治疗PRV有一定的效果，为今后的临床应用研究奠定了基础。