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论文主要围绕乙酰胆碱酯酶抑制剂(acetylcholinesterase inihibitor, AChEI)石杉碱甲对脑缺血损伤的保护作用及分子机制进行研究。氧糖缺乏(oxygen-glucose deprivation,OGD)培养6小时再含糖含氧培养6小时诱导大鼠神经胶质瘤细胞株C6细胞损伤,IκBα的磷酸化并降解,激活核转录因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB),从而导致诱导型一氧化氮合酶(inducible nitricoxide synthase,iNOS)、环加氧酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)以及一氧化氮(nitric oxide,NO)的过量表达。石杉碱甲1μM预处理2小时能明显提高C6细胞的存活率,抑制NF-κB的激活,下调iNOS、COX-2的蛋白量以及NO的含量,同时明显抑制AChE的活性。石杉碱甲的保护作用能被烟碱样乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptor, nAChR)的拮抗剂美加明及α7 nAChR的特异性拮抗剂α-银环蛇毒素部分逆转。大鼠局灶性脑缺血显著降低皮层的局部脑血流量,石杉碱甲0.1 mg/kg在栓塞的同时腹腔注射给药能明显提高缺血区皮层局部脑血流量。局灶性脑缺血再灌注导致缺血同侧皮层和纹状体发生大范围的梗死,NF-κB被激活,肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)mRNA水平明显上调,NO含量明显增加,iNOS及COX-2的蛋白量明显升高。在栓塞的同时腹腔注射石杉碱甲0.1 mg/kg一次,6小时后再次给药能显著缩小脑梗死的范围,抑制NF-κB的激活,降低TNF-α和IL-1β mRNA水平,下调NO的含量以及iNOS和COX-2的蛋白量,同时抑制AChE的活性。美加明5 mg/kg能部分逆转石杉碱甲的保护作用。小鼠短暂性脑缺血结合低血压损伤导致记忆障碍及皮层海马神经元缺失。小鼠术前2天口服石杉碱甲0.2 mg/kg,每天一次,术后连续服用7天,可明显改善记忆缺损和神经元形态学变化,增加皮层和海马脑区神经营养因子NGF、BDNF及TGF-β1的mRNA和蛋白水平,加强神经营养因子下游信号通路MAPK/ERK的激活。
第一部分的研究结果表明α7 nAChR介导的“胆碱能抗炎通路”以及神经营养样作用参与了石杉碱甲对脑缺血损伤的保护作用。
论文的第二部分探讨了AChEI石杉碱乙对OGD培养所致的大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤细胞株PC12细胞损伤的保护作用。OGD3小时再含糖含氧培养24小时诱导明显的细胞死亡,细胞形态发生改变,细胞脂质过氧化物水平、超氧化物歧化酶活性以及乳酸含量等多项生化指标升高。石杉碱乙(100、10、1μM)预孵育2小时,能不同程度地提高细胞的存活率,改善细胞损伤的形态以及降低上述各项升高的生化指标。石杉碱乙的保护机制可能与调节氧化能量代谢失衡有关。
论文的第三部分研究了双分子石杉碱乙衍生物FS-0311的药理作用。FS-0311是一种高效高选择性的、可逆的混合竞争性AChEI,它的口服生物利用度很好,对脑内AChE有长效的抑制作用;FS-0311能明显改善东莨菪碱或短暂性脑缺血诱导的小鼠记忆缺损现象;FS-0311保护PC12细胞对抗β-amyloid25-35的细胞毒性、OGD引起的细胞损伤以及星形孢菌素诱导的细胞凋亡,其细胞保护作用可能与调节氧化应激有关。因此FS-0311具有开发成为AD治疗药物的潜在前景。