【摘 要】
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随人们生活水平的提高,糖尿病等代谢性疾病越来越严重威胁人类健康,其病理机制及防治手段一直是人们研究的热点.脂肪细胞补体相关蛋白质(adipocyte complement related prote
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随人们生活水平的提高,糖尿病等代谢性疾病越来越严重威胁人类健康,其病理机制及防治手段一直是人们研究的热点.脂肪细胞补体相关蛋白质(adipocyte complement related protein 30,Acrp30,又名apM1)是近年来发现的具有多种生物功能的激素.它由脂肪细胞合成并分泌,作用于肌肉和肝脏,可促进肌肉内游离脂肪酸的氧化,抑制肝糖异生的酶类,抑制肝葡萄糖的输出,从而改善胰岛素抵抗状态,降低血糖、血游离脂肪酸和血甘油三酯.apM1蛋白质分子由4个部分组成:信号肽、无同源结构域、胶质蛋白质结构域和球状结构域.动物实验显示,球状结构域(gapM1)较全长蛋白质有更强的促进肌肉脂肪酸氧化的功能,更有效地降低血糖和血浆游离脂肪酸.因此,gapM1有望成为一种新型的降脂和降糖药物.我们应用RT-PCR的方法,构建人gapM1 cDNA克隆,分别用pLY4/JF1125、pGEX4T-1/BL21、pET28a(+)/BL21及pET32a(+)/BL21等原核表达系统表达.通过比较,选取高效表达重组gapM1(r-gapM1)的gapM1-pET28a(+)/BL21阳性克隆进行表达,并对其表达产物进行纯化和生物学活性研究.r-gapM1以包涵体形式存在,应用8M尿素进行变性溶解,复性后通过分子筛、离子交换层析柱纯化,1升发酵液中约得到50mg纯度达90％以上的r-gapM1.生物学活性研究初步证明,r-gapM1有促进血浆游离脂肪酸氧化的功能,为今后r-gapM1的应用研究奠定了基础.
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