【目的】对TCR表型为CD3~+CD4~-CD8~-的双阴性T细胞(Double negative T cells,DNT cells)作用于胰腺癌细胞的细胞毒性作用以及Trail/DR5信号通路在该细胞毒性作用过程中的的参与情况的基础研究,检测DR5这种受体蛋白在已切除胰腺癌患者的胰腺癌组织中的蛋白表达情况,对于双阴性T细胞临床应用于胰腺癌患者的免疫治疗的可能性进行研究。【方法】收集健康志愿者的外周血,并将其中的少量双阴性T细胞使用抗体吸附法进行大量扩增培养。通过运用CCK-8测定法对双阴性T细胞对胰腺癌细胞的在体外的毒性作用进行研究,建立胰腺癌的BALB/C雄性裸鼠荷瘤模型在体内研究双阴性T细胞对胰腺癌细胞的细胞毒性作用。通过上调DR5蛋白在胰腺癌细胞中的表达情况,进行双阴性T细胞及胰腺癌细胞的共培养来研究DR5蛋白在双阴性T细胞对胰腺癌细胞的细胞毒性中起到的作用。通过免疫组组织化学染色的方法检测DR5在已切除胰腺癌患者的胰腺癌组织中的蛋白表达情况,分析相对应患者临床及病理学特征与DR5蛋白表达情况的相关性。【结果】双阴性T细胞在经过抗体吸附法进行扩增培养后其纯度能达到94.9%。我们经过细胞学实验发现扩增后的双阴性T细胞能够有效地抑制胰腺癌细胞的生长(P<0.001),且当胰腺癌细胞与双阴性T细胞进行共培养实验后,Trail/DR5信号通路途径相关的蛋白DR5,caspase-8,裂解的caspase-8及裂解的caspase-3在胰腺癌细胞中的表达量增加,当加入3-BP(3?Bromopyruvate,3-溴丙酮酸)预处理胰腺癌细胞后,双阴性T细胞表现出的对癌细胞的细胞毒性作用增强,另外胰腺癌细胞中的相关蛋白DR5,caspase-8,裂解的caspase-8及裂解的caspase-3的表达量进一步升高。胰腺癌的BALB/C裸鼠荷瘤模型相关实验结果显示双阴性T细胞组和吉西他滨组裸鼠剥离后的癌组织的重量及体积都比空白对照组的裸鼠剥离后的癌组织要低,并且双阴性T细胞组和吉西他滨组的裸鼠剥离后的癌组织中通路相关蛋白DR5、caspase-8、裂解的caspase-8及裂解的caspase-3的表达量都比空白对照组的癌组织中的蛋白表达量要高。已切除的患者胰腺癌组织的免疫组化实验发现在癌组织中的DR5蛋白表达量要低于癌旁组织中的蛋白表达量(P<0.001),并且这与患者胰腺癌的分化程度、TNM分期、神经浸润和淋巴结转移具有明显的相关性(P=0.019,P=0.011,P<0.001,P=0.012)。【结论】双阴性T细胞对胰腺癌细胞的生长增殖有抑制作用,并且这种抑制作用与Trail/DR5信号通路有着密切的关系。研究中发现与胰腺癌癌旁组织相比DR5蛋白在已切除患者的胰腺癌癌组织中的表达量降低,这种蛋白表达量的降低与肿瘤的分化程度、TNM分期、神经浸润以及淋巴结转移具有明显的相关性。