【摘 要】
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目的:RNA干扰(RNA interference,RNAi)是指双链RNA(double-strand-ed RNA,dsRNA)分子在mRNA水平封闭相应序列基因的表达使其沉默的过程,是一种序列特异性的转录后基因沉默(PTGS)
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目的:RNA干扰(RNA interference,RNAi)是指双链RNA(double-strand-ed RNA,dsRNA)分子在mRNA水平封闭相应序列基因的表达使其沉默的过程,是一种序列特异性的转录后基因沉默(PTGS)。RNAi技术用于抗白血病的理论基础是dsRNA通过RNaseⅢ内切酶Dicer的作用产生有活性的21~23nt干扰性小RNA(small interfering RNA,siRNA),介导其互补同源mRNA的特异性降解,而阻断原癌基因和癌基因的表达,使白血病细胞向成熟分化或诱导凋亡,从而起到缓解白血病作用。原癌基因c-myc是myc家族的重要成员,其产物属核蛋白类的磷酸化蛋白质,在正常的细胞增殖,分化及凋亡过程中起重要作用。研究表明c-myc基因在HL-60细胞株和白血病病人的白血病细胞中均高表达,可能与白血病的发生、病程演变及预后等密切相关。本研究采用RNA干扰技术,体外化学合成针对c-myc基因的小分子干扰RNA(siRNA)转染HL-60细胞,封闭c-myc基因的表达,观察其对HL-60细胞增殖及凋亡的影响,从而为白血病的基因治疗提供新策略。 方法: 1.采用四甲基偶氮唑盐光吸收法(MTF法)检测c-myc-siRNA转染前后HU-60细胞的增殖情况;倒置显微镜观察细胞生长状态及形态学改变。 2.采用RT-PCR方法检测c-myc-siRNA对HL-60细胞c-myc mRNA表达的影响;用免疫组化方法检测c-myc-siRNA对HL-60细胞C-myc蛋白表达的影响。 3.应用流式细胞仪CELL Quest软件做DNA倍体及细胞周期分析,检测细胞凋
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