背景网膜素是主要由网膜脂肪组织分泌的一种新型脂肪因子,也被称为肠凝集素-1(Intelectin-1,ITLN-1)。它在人内皮细胞、心外膜脂肪、胸腺、小肠、结肠、网织红细胞、卵巢、肺和胎盘等组织中也有表达,而在皮下脂肪中表达甚微。ITLN-1在肥胖症和糖尿病患者中的表达水平下降,与体重指数、腰围和瘦素呈负相关。近来研究发现,冠心病患者血浆中的ITLN-1水平较正常人和代谢综合征患者水平显著降低。炎性肠病患者血浆中的ITLN-1较正常组也明显减低,而前列腺癌患者血中的ITLN-1水平显著升高。ITLN-1于胃癌细胞及肠化生细胞中存在高表达,且与胃癌浸润程度呈负相关,可能是一种预测胃癌患者生存期的新型指标。也有研究报道,ITLN-1可以抑制骨髓间充质干细胞的凋亡,并且促进细胞的增殖。此外,ITLN-1可以显著减小大鼠脑梗死体积,可以促进血管的新生,还可以减少脑损伤中神经细胞的凋亡。这表明在局灶性脑缺血后的损伤中,ITLN-1对神经具有保护作用,提示ITLN-1将是脑缺血疾病的一个新的治疗靶点,也可能是一种治疗的候选基因。鉴于人ITLN-1参与了机体多种生理及病理活动,可能是一种新型的生物学标记物,更是一个治疗疾病的潜在治疗靶点,而目前人ITLN-1基因在不同状态下差异性表达的机制尚不清楚,研究ITLN-1的转录机制对基因生理功能的进一步研究及对疾病的治疗干预提供理论支持。目的对人ITLN-1基因的启动子区域进行克隆并进行功能分析,找到人ITLN-1的启动子核心活性区域,对启动子核心活性区域的DNA序列进行转录因子预测,并在HEK 293细胞中进行初步验证。方法对人ITLN-1启动子区域进行截短体分析。以人外周血白细胞基因组DNA为模板,通过PCR扩增人ITLN-1基因起始密码子ATG上游5’侧翼区长度约0.3 kb、0.7 kb、1 kb、1.3 kb、1.7 kb、2 kb、3 kb DNA片段。将扩增获得的不同长度的DNA片段插入荧光素酶报告基因表达载体pGL4.10[luc2]中。成功构建了人ITLN-1启动子报告质粒pGL4.10(0/+296)、pGL4.10(-350/+296)、pGL4.10(-705/+296)、pGL4.10(-1003/+296)、pGL4.10(-1385/+296)、pGL4.10(-1751/+296)、pGL4.10(-2035/+296)、pGL4.10(-3012/+296)。重组载体经限制性内切酶酶切和基因测序鉴定正确后,将其与内参质粒pGL4.74[hRluc/TK]共转染HEK 293细胞,于48小时后检测重组质粒的荧光素酶活性。对人ITLN-1基因起始密码子ATG上游5’侧翼区(-705/+296)进行转录因子预测,并通过RT-PCR技术对转录因子“ZNF 35、Sox-6、KLF 14、Foxc 1”在HEK 293细胞中进行初步验证。结果成功构建了含不同长度的人ITLN-1基因启动子DNA片段的荧光素酶报告基因表达载体。所有构建的启动子报告基因载体的活性都高于基础质粒pGL4.10,且其结果差异具统计学意义(P<0.05)。其中重组载体pGL4.10(0/+296)的活性最强,约为基础质粒pGL4.10活性的6倍。结论人ITLN-1基因的启动子活性区位于其起始密码子ATG上游5’侧翼区(0/+296)区域,转录因子“ZNF 35、Sox-6、KLF 14、Foxc 1”与目的基因ITLN-1在HEK 293细胞中存在共表达,其可能结合于人ITLN-1启动子(0/+296)区域,并对人ITLN-1的转录起着调控作用。本研究结果为阐明人ITLN-1基因的调控机制奠定了必要的基础。