论文部分内容阅读
第一部分建立尿8-羟基脱氧鸟苷水平的梯度洗脱高效液相色谱法目的:建立测定尿8-羟基脱氧鸟苷（8-hydroxydeoxyguanosine,8-OHdG）水平的梯度洗脱高效液相色谱方法,并用该法测定武汉珠海队列中第一次随访武汉居民的尿8-OHdG水平。方法:尿样经Bond Elut LRC C18-OH固相萃取小柱预处理后,以反相C18色谱柱（X SELECT*T3 5μm 4.6×150mm column）为分析柱;高效液相色谱梯度洗脱（A流动相:1%甲醇溶液,B流动相:20%甲醇溶液）电化学检测法测量尿8-羟基脱氧鸟苷水平,控制流动相总流速为1.0ml/min。结果:该法测得8-OHdG线性相关系数R2为0.99960.9999,检测限为2.57nmol/L,平均加标回收率为85.7103.7%,相对标准偏差（relative standard deviation,RSD）为0.077.97%。结论:本方法耗时短、精密度高且灵敏,适于检测大样本人群的尿8-OHdG水平,可为评价氧化性DNA损伤提供技术支持。第二部分体格测量指数改变对尿8-羟基脱氧鸟苷水平的影响研究目的:研究体格测量指数的变化对尿8-OHdG水平的影响。方法:研究对象来自武汉-珠海队列（Wuhan-Zhuhai Cohort Study）中武汉市居住5年以上3053人（1880岁）,其中2283人完成3年后第一次随访（随访率74.8%）。基于此样本数,剔除基线体格测量指数值缺失者（n=34）,因尿样不足以检测尿8-OHdG者（n=206）后剩余2043人。剔除3年后随访体格测量指数值缺失者（n=743）以及因尿样不足以检测尿8-OHdG者（n=149）,最终1151人纳入本部分研究。用建立的梯度洗脱高效液相色谱法测定随访对象尿8-OHdG水平,并用尿肌酐浓度对尿8-OHdG检出浓度进行校正。用Student’s t检验分析基线与3年随访后的体重、腰围、臀围和体质指数等连续性变量差异。用卡方检验分析基线与3年随访后的文化程度、吸烟及饮酒状况等变量差异。用非参数Mann-Whitney秩和检验分析基线与3年随访后的腰臀比和尿8-OHdG水平差异。用限制性立方样条函数（restricted cubic spline,RCS）分析调整年龄、性别、文化程度、吸烟、饮酒等变量后体格测量指数改变与尿8-OHdG水平改变量的关系;进一步将研究对象依据3年间臀围改变百分比分为四个亚组:≤-2.5%,-2.5%2.5%（参考组）,2.5%5%和>5%。用方差分析比较连续型变量（如年龄和尿8-OHdG水平）在四个不同亚组间分布差异性,随后用最小显著差异法（Fisher’s Least Significant Difference test,LSD-t）进行组间两两比较。最后,用广义线性模型分析臀围改变量与尿8-OHdG水平改变量的关系。结果:（1）调整性别、年龄、文化程度、主动吸烟、被动吸烟、饮酒、锻炼、饮食频率和睡眠习惯等变量后,限制性立方样条模型显示:仅臀围值改变与尿8-OHdG水平的改变呈关联性（P for overall<0.001）,并且是非线性的（P for no line<0.001）;（2）单因素分析显示年龄、锻炼情况、午休时长、夜间睡眠时长、体重值、腰围值、体质指数（body mass index,BMI）、腰臀比（waist-to-hip ratio,WHR）以及尿8-OHdG水平改变与臀围改变有关（all P<0.05）。进一步LSD-t检验结果显示:臀围改变-2.52.5%组人群的尿8-OHdG水平（-0.37±1.10μmol/mol Cr）是低于臀围改变≤-2.5%（-0.08±1.05μmol/mol Cr）和>5%组（0.21±1.06μmol/mol Cr）（P<0.05）,臀围改变-2.52.5%组和2.55%组人群的尿8-OHdG水平的改变未呈现差异性（P>0.05）;（3）拟合的四个模型均提示,无论在全人群、BMI正常者（BMI<24kg/m2）、BMI超重者（BMI≥24kg/m2）还是在中心性肥胖者（男性:WHR≥0.90,女性:WHR≥0.85）中,尿8-OHdG水平是随臀围值的增加而增加（P for trend<0.05）。调整年龄、性别、文化程度、主动吸烟、被动吸烟、饮酒、锻炼、饮食频率和睡眠习惯等变量后,相对臀围增加-2.52.5%组而言,在中心性肥胖者中臀围降低≥2.5%组和臀围增加>5%组分别与尿8-OHdG水平改变呈正相关,相应的偏回归系数β（95%CI）分别为0.290（0.108,0.472）和0.553（0.273,0.833）。但在非中心性肥胖者中,相比于臀围增加-2.52.5%组,仅在臀围降低≥2.5%组人群中观察到尿8-OHdG水平改变平均增加了0.361μmol/mol Cr（95%CI:0.096,0.625）;（4）仅男性中发现相对基线和随访均为非中心性肥胖者而言,基线为非中心性肥胖者而随访中心性肥胖者的尿8-OHdG水平改变平均升高了0.30μmol/mol Cr（95%CI:0.06,0.55）,基线和随访均为中心性肥胖者的尿8-OHdG水平改变平均升高了0.46μmol/mol Cr（95%CI:0.16,0.75）。结论:全人群中臀围增加与尿8-OHdG水平增加呈剂量-反应关系;男性中心性肥胖者可能有尿8-OHdG水平增高的较大风险。