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研究目的:腺样囊性癌(Adenoid cystic carcinoma,ACC)在口腔恶性肿瘤疾病中,属于常见的唾液腺恶性肿瘤。其周围组织浸润性极强,使得瘤体与组织边界不明确,由于这复杂的肿瘤结构以及独特的生物学特征导致了低生存率。且腺样囊性癌易发生血行性感染有着较高的转移率。历年来,大量相关研究都在寻求对腺样囊性癌诊治过程的新方法。蛋白酶体抑制剂MG132在某些肿瘤的治疗过程中取得了良好的疗效,但是目前并没有相关文献对蛋白酶体抑制剂治疗腺样囊性癌的疗效进行报道。有文献报道蛋白酶体抑制剂对癌细胞增殖凋亡产生影响时与NRF2/KEAP1通路的调节有关。近期有研究表明在腺样囊性癌患者病理切片中核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid-2-related factor 2,NRF2)表达升高,其表达变化对癌细胞增殖与凋亡的影响也是本研究重点。在实验中将不同浓度蛋白酶体抑制剂,加入腺样囊性癌细胞系ACC-83中,观察其对腺样囊性癌细胞的增殖和凋亡的影响,以及对NRF2/KEAP1通路的调控,来探究蛋白酶体抑制剂对腺样囊性癌的影响及其影响机制。旨在为未来针对腺样囊性癌的临床治疗和药物开发过程中提供一定的实验室参考。研究方法:将腺样囊性癌细胞系ACC-83进行培养,运用细胞活力计数试剂盒8(cell-counting kit8,CCK8)分析不同浓度蛋白酶体抑制剂对腺样囊性癌细胞增殖的影响,并选取三组浓度进行研究观察。本实验使用流式细胞分析技术,来检测蛋白酶体抑制剂对细胞凋亡的影响,同时我们应用细胞免疫荧光技术来测定蛋白酶体抑制剂对腺样囊性癌细胞NRF2/KEAP1通路的影响,并运用蛋白质免疫印迹法(Western Blot,WB)检测NRF2/KEAP1通路和P62的蛋白表达。其mRNA的表达量将通过实时定量聚合酶链反应(Quantitative Real-time,RT-PCR)来检测。利用 NRF2 抑制剂(ML385)来评估NRF2/KEAP1通路在腺样囊性癌细胞的增殖以及凋亡过程中的作用。本实验所有数据分析均使用graphpad pyramid 8.0软件进行。使用two-tailed t检验,数据以平均数±标准误来表示。在所有分析中,P<0.05为具有统计学差异。研究结果:1、通过细胞活力检测结果显示,蛋白酶体抑制剂MG-132显著抑制腺样囊性癌细胞系ACC-83的增殖。通过与对照组进行对比,浓度为10μmol/L,40μmol/L,70μmol/L时的实验组明显抑制ACC-83细胞的增殖能力(P<0.05)。细胞流式结果显示,在浓度为10μmol/L,40μmol/L,70μmol/L时,蛋白酶体抑制剂MG132诱导腺样囊性癌细胞不同程度的凋亡(P<0.05)。2、与对照组对比,免疫荧光检测结果显示加入蛋白酶体抑制剂MG132后,实验组NRF2对比对照组明显增加,KEAP1对比对照组有降低。蛋白质免疫印迹法结果证明NRF2蛋白表达量上调,KEAP1蛋白表达量下调,与此同P62蛋白表达量下调。此外,RT-PCR检测结果显示NRF2的表达量上升,KEAP1和P62均呈相似降低趋势(P<0.05)。3、在加入NRF2抑制剂ML385后,从细胞活力检测和细胞流式技术结果中可以看出,蛋白酶体抑制MG132对腺样囊性癌细胞的抑制增殖和诱导凋亡的效果减弱了,并且通过蛋白免疫印迹法可以验证同时加入MG132、ML385的实验组与只加MG132实验组做对比可以看出NRF2蛋白表达降低。实验结论:数据显示,蛋白酶体抑制剂MG132在体外对腺样囊性癌细胞ACC-83有着抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用。其抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用很有可能与NRF2/KEAP1信号通路的调节相关。蛋白酶体抑制剂的运用将会是一种针对腺样囊性癌的新的诊治模式,这对患者和医务工作者来说都将是有益的,但是具体的应用应进行临床试验。