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研究目的：1.从人胎盘生长因子-1(human placental growth factor-1,P1GF-1)中筛选出可能具有抑制新生血管活性的多肽;2.通过细胞学实验和动物学实验检验筛选出的多肽是否具有抑制新生血管的作用;3.初步探索多肽发挥抑制新生血管作用的可能机制;4.通过功能学和组织形态学方法对筛选出的多肽进行生物安全性检测,为今后治疗新生血管相关性眼病的药物开发奠定基础。 研究内容和方法： 1.根据P1GF-1与其受体:血管内皮细胞生长因子受体-1(vascular endothelial growth factor receptor-1,VEGFR-1)结合的关键部位从人PIGF-1中筛选可能具有抑制新生血管活性的氨基酸片段,通过固相合成法合成相应的多肽,并用高效液相色谱(high-performance liquid chromatography,HPLC)和质谱分析(mass spectrometry,MS)对所合成多肽进行鉴定。 2.利用MTS方法、改良Boyden小室系统及Matrigel基质胶系统检测多肽对人脐静脉血管内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVECs)增殖、迁移和管腔形成的干预作用; 3.研究多肽对鸡胚尿囊膜(CAM)模型、小鼠角膜微囊袋模型、氧诱导小鼠视网膜病变(Oxygen-Induced Retinopathy)模型以及裸鼠肿瘤模型中新生血管的抑制作用;4.利用竞争性结合ELISA法、Western Blotting技术初步探讨多肽抑制新生血管活性的可能机制;5.利用电生理技术、组织病理切片以及透射电镜等方法观察多肽对小鼠视网膜潜在的毒性作用。 研究结果：从人P1GF-1中筛选出一段可能具有抗新生血管活性的多肽,命名为ZY1,MW:2221.66 Da。多肽ZY1对HUVECs细胞作用后能够有效抑制血管内皮生长因子(VEGF)诱导的细胞的增殖、迁移和管腔形成,与VEGF组之间具有显著差异(P＜0.05),且多肽ZY1对HUVECs无明显细胞毒性作用。多肽ZY1能有效抑制鸡胚尿囊膜血管生成、小鼠角膜新生血管、小鼠视网膜新生血管、以及裸鼠肿瘤新生血管的生成,与对照组的差异有统计学意义(P＜0.05)。多肽ZY1能与PIGF及VEGF竞争结合受体VEGFR-1,并且抑制VEGFR-1/ERK/AKT活化(P＜0.05)。玻璃体注射多肽ZY1后小鼠视网膜功能及形态学未发现明显改变(P＞0.05)。 结论：1.多肽ZY1能够有效抑制HUVECs细胞增殖、迁移和管腔形成:2.多肽ZY1可抑制体内新生血管的生成;3.多肽ZY1可能通过与P1GF/VEGF竞争结合受体,抑制下游信号转导通路,从而起到抗新生血管的作用;4.多肽ZY1无明显生物毒性作用。