【摘 要】
：
背景:股骨头坏死（Osteonecrosis of the femoral head,ONFH）是一种可导致股骨头塌陷进而发生髋关节残疾的疾病,其中,30%-70%的病例出现双侧坏死,该病严重影响患者的生活,给社会带来极大的经济负担。然而,ONFH的确切发病机制仍不清楚,大部分患者最后仍需行全髋关节置换手术（THA）。许多研究证实,外泌体在骨关节疾病中发挥了积极的意义。骨组织中所有细胞均能分泌外泌
论文部分内容阅读
背景:股骨头坏死（Osteonecrosis of the femoral head,ONFH）是一种可导致股骨头塌陷进而发生髋关节残疾的疾病,其中,30%-70%的病例出现双侧坏死,该病严重影响患者的生活,给社会带来极大的经济负担。然而,ONFH的确切发病机制仍不清楚,大部分患者最后仍需行全髋关节置换手术（THA）。许多研究证实,外泌体在骨关节疾病中发挥了积极的意义。骨组织中所有细胞均能分泌外泌体,其内容物的装载是由骨组织内细胞的状态决定的。因此,外泌体内容物的变化可以反映骨组织细胞内的生理变化。目前,尚无关于ONFH外泌体内代谢物变化的研究。代谢组学是最常用于分析代谢物变化的技术,它是基于分析化学技术,对代谢产物进行准确而又高效地定性或者定量分析。因此,运用超高效液相色谱/串联质谱（UPLC-MS/MS）技术研究股骨头坏死骨组织外泌体的代谢特征,这有助于我们发现疾病的新的代谢变化机制。目的:通过分析来源于股骨头坏死组织的外泌体内的代谢特征,阐释ONFH疾病的代谢变化,探究其发生重要改变的代谢通路,为研究ONFH的发病机制和治疗方法提供理论依据。方法:1、收集30例股骨头坏死（ONFH）骨组织和30例股骨颈骨折（FNF）骨组织标本,对每例患者进行X射线,核磁共振（MRI）和组织学检查,明确诊断。2、将股骨头组织标本研磨后,利用超速离心法提取外泌体。将提取出来的外泌体用动态光散射仪（DLS）、透射电子显微镜（TEM）和蛋白质印迹法鉴定。3、使用超高效液相色谱/串联质谱（UPLC-MS/MS）分析ONFH外泌体的代谢物谱,并对代谢数据进行主成分分析（PCA）和正交偏最小二乘判别分析（OPLS-DA）来分析外泌体的代谢谱,并找到其中变化明显的代谢物。4、筛选出变化最明显的代谢物作为潜在的诊断标志物,进行受试者工作特征曲线（ROC曲线）分析,评估其诊断意义。5、通过Metaboanalyst数据库分析变化明显的代谢物,从而确定其代谢通路并进行可视化。结果:1、成功收集30例ONFH骨组织和30例FNF骨组织标本。对比每例患者的X射线,核磁共振（MRI）和组织学检查结果,确认诊断正确。2、DLS的结果显示,这些外泌体的大小大都在30 nm-150 nm之间。TEM分析显示外泌体为双层脂质包裹,类圆盘状形态,大小在100nm左右。Western blot显示外泌体的标记物CD9、TSG101、CD63和ALIX显著富集。以上结果表明组织中的外泌体已成功分离。3、外泌体样本经上述条件分析后得到的数据,经处理后得到PCA图。结果显示,来自于ONFH的外泌体的成分和来自于FNF的外泌体的成分在维度上,两者有一定的分离趋势。OPLS-DA运用正交偏最小二乘判别分析建立代谢物表达量与样品类别之间的关系模型,来实现对样品类别的预测。模型评价参数R~2Y、Q~2分别为0.749、0.724,R~2Y和Q~2均大于0.5,表明模型稳定可靠。4、差异代谢物的生物信息学分析显示,在来源于ONFH和FNF的外泌体之间检测到45种差异代谢物。我们筛选出赖氨酸、溶血磷脂、脯氨酸和磷脂酸作为潜在的生物标志物。5、代谢通路分析显示,在来自于ONFH的外泌体中,核黄素代谢、泛酸和辅酶a生物合成和甘油磷脂代谢改变最为显著。结论:我们的研究通过对ONFH患者组织提取的外泌体进行代谢谱分析,并构建了PCA和OPLS-DA模型,共鉴定45种差异代谢物。确定了4种潜在的生物标志物（赖氨酸、溶血磷脂、脯氨酸和磷脂酸）。代谢通路分析显示,在来自于ONFH的外泌体中,核黄素代谢、泛酸和辅酶a生物合成和甘油磷脂代谢与ONFH最相关。
其他文献
目的:探讨Akt1特异性si RNA和P53共表达质粒对肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响。方法:我们构建了一种共表达Akt1特异性si RNA和野生型P53基因的双表达质粒（pSi-Akt1-P53）。将pSi-Akt1-P53共表达质粒转染至肝癌Hep-G2细胞,采用实时荧光定量PCR法和蛋白质免疫印迹法检测细胞中Akt1和P5
目的:通过应用原发性醛固酮增多症手术结局（PASO）标准比较肾上腺全切与部分切除术治疗单侧醛固酮瘤的疗效,为单侧醛固酮瘤的手术方式选择提供依据。方法:2013年1月-2020年3月,245例单侧醛固酮瘤患者行手术治疗,后腹腔镜下肾上腺全切术（全切组）124例（50.6%）,后腹腔镜下肾上腺部分切除术（部分切组）121例（49.4%）。术后平均随访24个月,比较两组基本特征、手术资料、围手术期并发症
目的:对急性胰腺炎患者感染耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌（CRE）的危险因素及分子流行病学特征进行统计分析。方法:选取本院2011-2019年期间收治的240例AP合并感染的患者为研究对象。按照是否感染CRE,分为实验组（60例）和对照组（180例）,结合患者感染的临床特点,采用单因素和多因素Logistic回归分析AP患者感染CRE的危险因素。并采用聚合酶链式反应（PCR）和琼脂糖凝胶电泳（AGE）检
目的:泌乳素（PRL）是由垂体前叶细胞合成和分泌的一种多肽激素,在人体内发挥着多种生理功能,对于维持内环境的稳态至关重要。PRL的紊乱与许多疾病密切相关,是临床内分泌中最普遍的问题之一。准确、灵敏的检测PRL对于相关疾病的预防、诊断和治疗具有重要意义。因此,本研究拟基于高分支状的钯铂纳米枝晶（PdPt NDs）和铁基金属有机骨架NH2-MIL-53（Fe）,构建一种新型的电化学免疫传感器超灵敏的检
目的:探讨上肢与下肢人工血管动静脉内瘘（AVG）的通畅率及并发症发生况。方法:收集2016年1月至2018年2月于重庆医科大学附属第一医院金山医院127例建立AVG患者临床资料,其中上肢AVG 110例,下肢AVG 17例。统计分析患者的临床特征、术后初级通畅率、次级通畅率、并发症等。结果:上肢AVG组患者女性比例低于下肢AVG组,术前透析时间短于下肢AVG组,差异均有统计学意义（P<0.05）。
癌症的早发现、早诊断和及时开展精准治疗,有助于遏制肿瘤的发展,提高患者的生存年限,降低死亡率。因此,临床标本中恶性肿瘤细胞的快速检出在癌症的发生、治疗和预后研究中起着关键性的作用。但是,由于临床样品的复杂环境使得很多方法难以检测样品中的低丰度肿瘤细胞,极大地限制了早期诊断的灵敏度和特异性。基于核酸适配体的肿瘤细胞检测方法具有设计灵活、低成本等优势,但是单价的适配体识别靶标时候,仍然存在选择性差、靶
目的叉头盒（Forkhead box,FOX）超家族与肿瘤的发展密切相关。叉头盒S1（FOXS1）作为FOX家族最近发现的新成员之一,已被发现可能与恶性肿瘤相关。然而,其在肝细胞癌中的作用尚不明确。本研究的目的是确定FOXS1在肝细胞癌中（HCC）中的表达水平并进一步探究其在肝癌发展中的作用。方法我们通过Real-time PCR在m RNA水平检测了FOXS1在肝癌中的表达量;接下来又通过Wes
目的:1.调查我国重庆地区耐碳青霉烯肠杆菌目（Carbapenem-resistant Enterobacteriales,CRE）细菌感染的临床流行病学特征;2.了解我院主要CRE的分子流行特征。方法:本项前瞻性、观察性队列研究招募了从2018年6月至2019年12月被诊断患有CRE感染的患者。排除之前曾参与该研究且在感染开始时拒绝治疗的患者。我们对CRE进行了菌株鉴定和分子表征,包括菌株分型。
目的:探讨载脂蛋白E（Apolipoprotein E,ApoE）基因多态性、血脂水平与动脉瘤性蛛网膜下腔出血（Aneurysmal subarachnoid hemorrhage,a SAH）的关系。方法:病例对照研究。病例组为确诊的a SAH患者85（男37,女48）例,平均年龄（57±19）岁;对照组86（男37,女49）例,平均年龄（59.5±19.5）岁。检测ApoE基因多态性、血脂水平
目的:探讨自发性孤立性肠系膜上动脉夹层（SISMAD）的治疗策略选择。方法:回顾性分析2014年1月至2019年12月重庆医科大学附属第一医院收治的94例SISMAD患者的临床资料、诊疗经过及随访情况,根据治疗策略分为保守治疗组和支架置入组,分析总结不同治疗策略的疗效及预后。结果:94例患者均以腹痛为主要临床表现,其中保守治疗52例（55.32%）,支架置入42例（44.68%）,无患者接受开放手