前言 越来越多的资料显示，抑郁症并非完全的功能性精神障碍，至少有一部分确有其器质性基础。近年来研究发现，应激性生活事件是抑郁症的明显促发因素。慢性应激引起体内，尤其是中枢神经系统(CNS)内的一系列生理生化改变，最终可导致大脑器质性损害。海马结构是介导应激反应的最重要脑区之一，对应激反应起整合作用；海马中皮质类固醇(GC)受体的双重分布使海马在应激反应中更具有易受性。因此，研究抑郁症的发病机制和治疗药物时，不应单纯针对神经递质的改变，还应考虑到神经元的损伤，并把减轻神经元损伤、保护脑组织作为抑郁症治疗的一个重要方面。 目前普遍认为，可以将c-fos等即刻早期基因(IEG)作为脑细胞功能性的示踪标志；c-fos的表达已经成为研究心理应激脑中介机制的一个重要窗口和手段。因此，本研究以c-fos的表达作为神经元功能活性的标志，旨在研究慢性重复应激大鼠和慢性综合应激所致的抑郁症模型大鼠海马神经元活性的改变；探讨慢性应激反应时，c-fos的表达与海马结构和功能改变的关系；帮助揭示抑郁症的发病机制，为临床上对抑郁症开展病因学治疗提供依据。 材料和方法 一、实验材料 1 实验动物 采用青年雄性Wistar大鼠45只，体重200-3009。由中国医科大学实验动物中心提供。 2主要试剂兔抗大鼠C一FOS多克隆抗体，生物素标记的山羊抗兔I步，SABC免疫组化试剂盒，均购于Boster公司。 3主要仪器YSD一4G型药理生理实验多用仪;Meta MO甲丫Cod Snap留Ax70计算机图像分析系统。 二、实验方法 1动物分组 实验大鼠适应环境饲养1周以后，称重，并采用Open一field法(开场实验)测定行为，之后将大鼠随机分为急性应激对照组，重复应激组和慢性综合应激抑郁症模型组，每组各巧只大鼠。 2应激过程 急性应激对照组记为A组，分2笼喂养;第1一21天不给予任何刺激;第22天强迫冰水游泳应激smin。第6天和第21天末均进行open一field法评分并称重。 重复应激组记为R组，单笼喂养;第1一7天每天强迫冰水游泳应激5而n。第6天末行Open一field法评分并称重。 慢性综合应激抑郁症模型组记为C组，单笼喂养;第1一21天每天接受各种不同的应激:电击足底，冰水游泳，摇晃，夹尾，热应激，禁食，禁水;第22天强迫冰水游泳应激5而n。第21天末行Open一field法评分并称重。 3灌流取材与切片 每组实验大鼠于最后一次游泳应激开始后的第。，30，60，120和240niln，各随机选取3只，用戊巴比妥钠行腹腔麻醉后，经左心室快速灌注37℃生理盐水Zoonil，继之持续灌注4℃的4%多聚甲醛溶液300d;然后剥离脑，后固定48小时以上;梯度乙醇脱水后，石蜡包埋，行冠状切片。 4免疫组化ABC法检测切片中的FOS蛋白。 5图像分析 每只大鼠选取海马较完好的切片4张，在计算机图像分析系统上分别测量双侧海马CA3区和齿状回(DG)内FOS阳性细胞的相对切面面积比和平均目标灰度值。 6统计学处理 采用SPSSll .0统计学软件对数据进行分析。实验结果 一、光镜下的海马神经元 光镜下观察，A组大鼠海马CA3区锥体细胞和DG颗粒细胞排列都较整齐、密集;R组与A组相似;C组大鼠DG颗粒细胞与A组相比没有明显改变，但CA3区锥体细胞排列稀疏，细胞有的呈长圆形或梭形，数量有所减少，细胞间隙增大。 二、体重和开场行为评定 应激后的R组和C组大鼠的体重，与A组相比，无明显差异;中央格停留时间延长，水平穿越格数减少，竖立次数减少，修饰次数减少，粪便粒数增多(P<0.01一0.05)。 三、游泳应激后大鼠海马中FOS蛋白的表达 (一)各组大鼠FOS表达的时程 IA组①在海马CA3区，与0而n相比，60和120min时的面积比增加(P<0.01)，峰值出现在120而n;灰度值降低(P<0.01)，波谷出现在12Omin。②在DG，与0而n相比，60和120min时的面积比增加(P<0.01一0.05)，峰值出现在120而n;60，120和240而n时的灰度值降低(P<0 .01一0 .05)，波谷出现在60而n。 ZR组①在海马CA3区，与0而n相比，60而n时的面积比增加(P<0.01)，峰值出现在60而n;60和120而n时的灰度值降低(P<0.01)，波谷出现在120而n。②在nG，与0而n相比，60，120和240而n时的面积比增加(P<0.01一0.05)，峰值出现在120而n;60和120而n时的灰度值降低，波谷出现在60min(P<0 .01一0.05)。 3C组①在海马CA3区，与O而n相比，60min时的面积比增加(P<0.01)，峰值出现在60而n;各检测时点的灰度值与omin相比均无显著差异，无明显表达峰值。②在DG，与omin相比，60面n时的面积比增加(均为P<0.05)，峰值出现在60而n;各检测时点的灰度值与O而n相比均无显著差异，无明显表达峰值。 (二)各组大鼠FOS表达的比较 IA组与R组①R组大鼠CA3区数据与A组相比，面积比在60和120而n时降低(P<0.01一0.05);灰度值无显著差异。②R组大鼠DG数据处与A组相比，面积比在60和120而n时降低(P<0 .01);灰度值无显著差异。 ZA组